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人趋化因子CCL3L1融合蛋白表达和活性分析
引用本文:徐斌,石英,李俊红,张薇,赵国庆,陈德喜,吴昊. 人趋化因子CCL3L1融合蛋白表达和活性分析[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2007, 27(8): 688-692
作者姓名:徐斌  石英  李俊红  张薇  赵国庆  陈德喜  吴昊
作者单位:100069,首都医科大学附属北京佑安医院
基金项目:北京市科委科技计划重大项目(D0906003040591)
摘    要:目的人趋化因子CCL3L1进行融合蛋白原核表达和真核表达,纯化后活性分析。方法克隆人类CCL3L1eDNA,构建两种CCL3L1表达载体,获得两个CCL3L1融合蛋白,一个在BL21大肠杆菌表达的GST-CCL3L1融合蛋白,另一个在跎果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白。同时克隆了pcDNA3.1-flag-CCR5表达载体,培养了稳定表达flag-CCR5的细胞株,进行人趋化因子CCL3L1活性分析。结果成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白原核表达载体pGEX-4T和真核表达载体pMT/BiP/V5-His,免疫沉淀法检测和Westernblot法分析His-CCL3L1蛋白在浓度1nmol/L到50nmol/L存在剂量依赖性,浓度50nmol/L到100nmol/L没有剂量依赖性。纯化的His-CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体。结论成功表达了融合蛋白GST-CCL3L1和His-CCL3LI,果蝇细胞表达的His-CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性,为进一步制备CCL3L1单克隆和多克隆抗体及研究CCL3L1影响HIV-1感染的机制提供基础资料。

关 键 词:CCL3L1 HIV AIDS CCR5 趋化因子
修稿时间:2007-01-16

Human CC ligand 3-like protein 1 (CCL3L1) fusion protein expression and function assay
XU Bin,SHI Ying,LI Jun-hong,ZHANG Wei,ZHAO Guo-qing,CHEN De-xi,WU Hao. Human CC ligand 3-like protein 1 (CCL3L1) fusion protein expression and function assay[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2007, 27(8): 688-692
Authors:XU Bin  SHI Ying  LI Jun-hong  ZHANG Wei  ZHAO Guo-qing  CHEN De-xi  WU Hao
Affiliation:Department of Medicine, Beijing Youan Hospital, Affiliated Capital University of Medical Sciences, Beifing 100069, China
Abstract:
Keywords:CCL3L1   HIV   AIDS   CCRS   Chemokine
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