| 硫酸软骨素酶ABC Ⅰ分泌型真核表达质粒的构建 |
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| 作者姓名： | 高慧玲 王虔 于士柱 陈秀菊 孙翠云 安同岭 |
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| 作者单位： | 天津市神经病学研究所神经病理研究室,天津市神经损伤变异与再生重点实验室,教育部中枢创伤修复与再生重点实验室,天津医科大学总医院,300052 |
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| 基金项目： | 天津市高等学校科技发展基金重点项目,天津市科技支撑计划重点项目,天津市高等学校科技发展基金计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立硫酸软骨素酶ABC Ⅰ(ChABC Ⅰ)的分泌型真核表达载体,并在胶质瘤细胞系中对其表达情况进行观察.方法 以真核表达载体pCDNA3.1/V5/HIS A为载体,将基底膜40蛋白信号肽编码区和ChABC Ⅰ成熟肽段编码区串联插入其多克隆位点,构建分泌型真核表达质粒pCDNA-BMS-CABC Ⅰ.采用该质粒转染人胶质瘤细胞系TJ905,培养3 d后将培养液上清液行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果 考马斯亮蓝染色显示有新条带出现,条带的相对分子质量大小与理论值一致,免疫印迹检测显示有V5免疫反应性特异性条带出现.结论 该真核表达载体可介导硫酸软骨素酶ABC Ⅰ在神经胶质细胞来源的细胞中以分泌蛋白形式表达.
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| 关 键 词： | 软骨素硫酸酶类 质粒 转染 神经胶质瘤 免疫印迹法 |
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