食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析

目的：筛选出能高效表达且可溶性好的NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)融合表达载体。方法：将NGAL cDNA全长片段分别定向克隆到表达载体的BamHI EcoRI位点，构建NGAL基因的4种融合表达载体，然后分别转化大肠杆菌并进行IPTG诱导小样表达，监测各NGAL融合蛋白在不同诱导时间内的表达量及其可溶性等。选择pHis-NGAL和pDsbA2．0-NGAL进行IPTG诱导大样表达，通过SDS-PAGE比较表达产物的量与可溶性。结果：成功构建出4种NGAL融合表达载体。经IPTG诱导小样表达后，4种载体的表达水平及其可溶性明显不同，DsbA2．0-NGAL、His-NGAL和Trx-NGAL融合蛋白表达量分别占菌体总蛋白的33．3％、32．3％、28．7％，而它们的可溶性部分分别占各自总NGAL融合蛋白的96．8％、95．3％和63．0％。对pDsbA2．0-NGAL和pHis-NGAL进行IPTG诱导大样表达后发现，DsbA2．0-NGAL融合蛋白的表达量与可溶性较好。结论：pDsbA2．0-NGAL表达载体是能高效表达且可溶性好的NGAL融合蛋白表达载体。