| 摘 要： | 目的研究中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法设定不同浓度的NE在不同时间内作用于HepG2细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖情况;用流式细胞仪技术(flow cytometry,FCM)分析特定浓度下NE对细胞凋亡率的影响;Western blotting法检测NE与HepG2细胞内PI3K/AKT信号通路活化状态的关系;激光共聚焦法检测NE是否通过内涵体途径进入细胞内发挥作用。结果不同浓度的NE(20 nmol/L、40 nmol/L)作用细胞于不同的时间点(6 h、12 h、24 h、48 h),CCK-8法检测细胞存活率,发现NE可以促进细胞增殖,两者之间有明显的剂量效应关系(P0.01)和时间效应关系(P0.05);与HepG2细胞相比,NE/HepG2细胞经过15μmol/L丝裂霉素(MMC)处理后,FCM检测凋亡率由(39.7±2.3)%降至(15.7±1.5)%(P0.01);20 nmol/L NE、40 nmol/L NE分别处理细胞HepG2(NE/HepG2组)后p-AKT的水平显著提高(P0.05),且实验组间比较,差异有统计学意义(P0.05);10μmol/L ly294002、10μmol/L ly294002+40 nmol/L NE分别处理细胞HepG2后p-AKT的水平明显降低(P0.05),但实验组间比较,差异无统计学意义(P0.05);激光共聚焦实验表明NE可以通过内吞作用进入细胞内,且主要位于胞内靠胞膜侧,在应用细胞内吞作用抑制剂DYNASORE后,进入细胞内NE明显减少。结论NE对HepG2细胞增殖有促进作用,呈显著的剂量效应关系和时间效应关系,这一促进作用是通过NE进入肝癌细胞内增强信号通路PI3K/AKT中p-AKT的表达实现的。
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