| 人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用 |
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| 引用本文： | 任哲,张美英,王一飞,朱钦昌,张春龙,陆大祥,胡巢凤,李久香,张佩琢,杨志荣.人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用[J].中国病理生理杂志,2007,23(12):2444-2447. |
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| 作者姓名： | 任哲 张美英 王一飞 朱钦昌 张春龙 陆大祥 胡巢凤 李久香 张佩琢 杨志荣 |
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| 作者单位： | 1四川大学生命科学学院，四川 成都 610000;暨南大学 2生物医药研究与开发基地,3医学院，广东 广州 510632;4上海吉玛制药技术有限公司，上海 201203 |
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| 基金项目： | 广东省工业攻关项目;暨南大学校科研和校改项目 |
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| 摘 要： | 目的： 快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA，为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法: 应用RT-PCR扩增人HSV-1 F株UL40基因，将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞，通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果: 倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达，流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99％和84.00％。结论: 成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40，并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。
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| 关 键 词： | 疱疹病毒Ⅰ型 人 基因 UL40 siRNA |
| 文章编号： | 1000-4718（2007）12-2444-04 |
| 收稿时间： | 2006-05-15 |
| 修稿时间： | 2006-08-15 |
Construction of human HSV-1 UL40 gene recombinant and its application in siRNA screening |
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| REN Zhe,ZHANG Mei-ying,WANG Yi-fei,ZHU Qin-chang,ZHANG Chun-long,LU Da-xiang,HU Chao-feng,LI Jiu-xiang,ZHANG Pei-zhuo,YANG Zhi-rong.Construction of human HSV-1 UL40 gene recombinant and its application in siRNA screening[J].Chinese Journal of Pathophysiology,2007,23(12):2444-2447. |
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| Authors: | REN Zhe ZHANG Mei-ying WANG Yi-fei ZHU Qin-chang ZHANG Chun-long LU Da-xiang HU Chao-feng LI Jiu-xiang ZHANG Pei-zhuo YANG Zhi-rong |
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| Institution: | 1College of Life Sciences,Sichuan University,Chengdu 610000,China;2Biomedicine Research and Development Center of Jinan University,3Medical College of Jinan University,Guangzhou 510632,China;4Shanghai GenePharma Co.,Ltd，Shanghai 201203,China.E- mail: twangyf@jnu.edu.cn |
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| Abstract: | AIM: To construct the recombinant of human herpesvirus Ⅰ(HSV-1) UL40 gene and to screen siRNAs of silencing efficiently human HSV-1 UL40 gene expression.METHODS: The recombinant UL40-EGFP plasmid (pEGFP-N1-UL40) was constructed by cloning the UL40 gene into pEGFP-N1.siRNA target UL40 gene and pEGFP-N1-UL40 were cotransfected into Vero cells.The effects of RNAi were detected by green fluorescence signals.RESULTS: siRNA3,siRNA4 reduced prominently the expression of UL40 gene.The silence efficiency was 76.99% and 84.00% respectively.CONCLUSION: We succeed in construction of the pEGFP-N1-UL40 recombinant,and screen out siRNA3 and siRNA4 of silencing efficiently human HSV-1 UL40 gene expression. |
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| Keywords: | siRNA |
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