三株肺腺癌单克隆抗体的筛选和初步鉴定

目的:制备肺腺癌单克隆抗体,筛选具有较高肺癌亲和性的单克隆抗体。方法:通过杂交瘤技术制备一组肺转移腺癌H2009细胞特异性单克隆抗体,以一定通量的细胞ELISA正、负筛选,初步确定抗体的肺癌特异性,经过色谱技术获得高纯抗体,免疫印迹确定抗体识别细胞膜蛋白分子量大小,应用流式细胞分析和免疫组化进一步分析对肺癌组织结合的特异性。结果:筛选出19株高结合肺腺癌细胞系,弱结合或不结合正常肺上皮细胞的杂交瘤,类别鉴定均为Ig M,通过亲硫色谱纯化杂交瘤培养上清获得高纯度抗体,其中三株抗体7C1、9H4和11C10均识别细胞膜蛋白,分子量介于20~110 k D,条带清晰,经病理组织验证7C1和9H4具有较好的肺癌组织亲和性,而对正常肺上皮阴性或弱染色;单抗11C10除结合肺癌上皮组织外,对肺正常上皮和乳腺正常上皮细胞也呈一定阳性反应,结合蛋白低水平泛表达于上皮来源细胞。结论:通量筛选出三株杂交瘤,初步确定具有较好的肺腺癌特异性,为深入探讨它们识别的抗原及相关的肺癌免疫研究奠定了基础。