β-catenin RNA干扰对黄精丸治疗学习记忆障碍小鼠的信号通路机制的影响

目的 用侧脑室β-连环蛋白（β-catenin）RNA干扰（RNAi）黄精丸治疗D-半乳糖联合东莨菪碱模拟的阿尔茨海默病（AD）小鼠，以探讨黄精丸防治AD的神经保护信号分子机制。方法 81只雄性昆明种小鼠随机分成正常组，假手术组，AD模型组，多奈哌齐组，黄精丸+scrambled组（即β-catenin RNA干扰组），黄精丸+RNAi组，黄精丸组，多奈哌齐组和黄精丸组每组小鼠8只，其余各组每组13只。连续5周采用D-半乳糖联合东莨菪碱注射法给后5组的各小鼠制作AD模型。造模后第4周第1天，给黄精丸+RNAi组各小鼠右侧脑室一次性注射聚乙烯亚胺（PEI-LMW）/β-catenin siRNAs纳米络合物0.75 μL以脑内β-catenin RNA干扰处理，黄精丸+scrambled组各小鼠右侧脑室一次性注射络合复合物0.75 μL以作β-catenin干扰对照，假手术组各小鼠侧脑室内注射生理盐水0.75 μL。侧脑室注射2周后，经确认小鼠β-catenin RNAi成功，再给多奈哌齐组小鼠灌胃多奈哌齐（6.5×10^-4 g·kg^-1），给黄精丸+scrambled组，黄精丸+RNAi组，黄精丸组各小鼠灌胃黄精丸（2.5 g·kg^-1），持续4周。灌胃结束后，采用跳台实验评价各小鼠的学习记忆能力差异；尼氏染色计数各组小鼠大脑皮层S1Tr区及海马CA1，CA3区神经元数量差异；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组小鼠大脑Wnt1，蓬松蛋白极性片段2（DVL2），糖原合成酶激酶3β（GSK-3β），β-catenin，细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁） mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠大脑Wnt1，DVL2，GSK-3β，β-catenin，CyclinD₁蛋白表达水平。结果 AD小鼠侧脑室内β-catenin RNAi可明显抑制其脑内β-catenin表达，可成功实现目的基因沉默。与正常组比较，AD模型组小鼠学习与记忆成绩显著下降，跳台的错误次数增多（P<0.01），大脑皮层S1Tr区及海马CA1，CA3区神经元神经元数量显著减少（P<0.01），大脑Wnt1，DVL2，β-catenin，CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平均显著下降（P<0.01），GSK-3β mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与AD模型组比较，黄精丸组小鼠的学习与记忆成绩均显著升高，跳台错误次数均显著降低，大脑皮层S1Tr区及海马CA1，CA3区神经元数量显著升高，大脑Wnt1，DVL2，β-catenin，CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平均显著升高，GSK-3β mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与黄精丸组比较，黄精丸+RNAi组小鼠的学习与记忆成绩均下降，跳台错误次数显著升高（P<0.01），大脑皮层S1Tr区及海马CA1，CA3区神经元数量显著降低（P<0.01），大脑Wnt1，DVL2，GSK-3β mRNA及蛋白表达水平无明显变化，β-catenin，CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论 黄精丸可通过激活Wnt/β-catenin信号通路转导发挥治疗AD作用。