黄精丸抑制D-半乳糖和冈田酸所致学习记忆障碍小鼠海马神经元tau蛋白过磷酸化的作用机制

目的 探讨黄精丸对D-半乳糖和冈田酸所致学习记忆障碍造模的阿尔茨海默病（AD）小鼠大脑海马神经元糖原合成酶激酶3β（GSK-3β），蛋白磷酸酶2A（PP2A）活性的影响及其抑制tau蛋白过磷酸化机制。方法 采用小鼠颈背部皮下注射1.0% D-半乳糖液（0.14 g·kg^-1·d^-1，连续4周）后，再右侧脑室一次性注射（75 ng）冈田酸2 μL，制作小鼠AD模型，经Morris水迷宫检测挑选造模成功的AD小鼠，再随机分为AD模型组，美金刚组（1.3×10^-3 g·kg^-1·d^-1），黄精丸组（2.5 g·kg^-1·d^-1），另设假手术组和正常组；同时点给假手术组的小鼠右侧脑室一次性注射生理盐水2 μL处置作造模对照。造模2周后给两实验药物组小鼠灌胃相应剂量实验药物，持续4周。另外，AD造模2周后，同时给假手术组及AD模型组小鼠每天灌胃等量生理盐水，持续4周；正常组小鼠仅日常饲养。灌胃结束后，采用旷场实验及跳台实验评价各小鼠的探索活动能力、焦虑水平及学习记忆能力差异；尼氏染色检测各组小鼠海马CA1，CA3区神经元数量差异；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组小鼠海马GSK-3β，PP2A mRNA表达变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠海马GSK-3β，PP2A，磷酸化tau（p-tau）与总tau（t-tau）蛋白的表达变化。结果 与正常组比较，AD模型组小鼠自发活动能力与探索行为能力低、焦虑水平高，表现出较明显的痴呆状态，少动且易呆卧躲藏，学习反应时间要长，学习记忆错误次数明显增多，海马CA1与CA3区神经元数量均减少，PP2A mRNA及蛋白表达显著下降，GSK-3β mRNA及其蛋白表达，p-tau蛋白水平及p-tau/t-au值均显著升高（P<0.01），t-tau蛋白表达水平有所降低但差异无统计学意义。与AD模型组比较，黄精丸组小鼠自发活动能力与探索行为能力强、焦虑水平低、学习与记忆成绩明显提高，海马CA1与CA3区神经元数量增多，PP2A mRNA及蛋白表达显著升高，GSK-3β mRNA及蛋白表达，p-tau蛋白水平及p-tau/t-tau值均显著降低（P<0.01），但t-tau蛋白表达水平差异无统计学意义。结论 黄精丸可抑制AD小鼠海马神经元tau蛋白过磷酸化，恢复tau蛋白功能，保护海马神经，进而发挥抗AD作用，其机制可能与调控海马神经元GSK-3β与PP2A活性平衡有关。

Mechanism of Huangjingwan in Inhibiting Tau Hyperphosphorylation in Hippocampal Neurons of Mice with Alzheimer's Disease Induced by D-galactose and Okadaic Acid Resulting in Learning and Memory Disorders