母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用

目的 观察母婴分离/束缚应激诱发焦虑抑郁小鼠海马小胶质细胞激活和白细胞介素-1β（IL-1β），白细胞介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达情况，探讨温阳解郁方抗焦虑抑郁的机制。方法 84只雄性C57BL仔鼠于出生后第0天（PD0）随机分为空白组、束缚应激组和造模组，造模组采取母婴分离结合束缚应激制备焦虑抑郁模型，将造模组按随机数字表法分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组。在离乳第21天（PD21）至成年第90天（PD90），空白组、束缚应激组和模型组饲喂正常饲料，其余饲喂药混饲料（温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组用药剂量分别为5.85，12.03，16.71 g·kg^-1及2.60 mg·kg^-1）。采用旷场实验，O迷宫和社会交互实验评估模型组小鼠焦虑抑郁状态；免疫组化法（IHC）观察海马小胶质细胞及离子钙接头蛋白-1（Iba-1）表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-1β，IL-6，TNF-α，Iba-1，糖皮质激素受体（GR）mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著减少（P<0.01），开臂活动时间与活动总路程明显减少（P<0.05，P<0.01），训练探察时间和辨别探查时间显著增加（P<0.01），Iba-1蛋白及mRNA表达，IL-1β，IL-6，TNF-α mRNA表达水平显著升高（P<0.01），GR mRNA表达水平显著降低（P<0.01），IHC结果显示小胶质细胞的过度激活。与模型组比较，温阳解郁方及氟西汀组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著上升（P<0.01），开臂活动时间显著上升（P<0.01），训练探察时间和辨别探查时间明显降低（P<0.05，P<0.01）；Iba-1蛋白及mRNA表达，IL-1β，IL-6，TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），GR mRNA表达水平显著上升（P<0.01），IHC结果表明小胶质细胞的形态恢复；温阳组和解郁组小鼠开臂活动时间显著上升（P<0.01），辨别探查时间明显降低（P<0.05），Iba-1蛋白及mRNA表达，IL-6 mRNA表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；温阳组小鼠GR mRNA表达水平明显上升（P<0.05），TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05）；解郁组小鼠5 min运动总路程显著上升（P<0.01），训练探察时间明显降低（P<0.05），IL-1β mRNA表达水平明显降低（P<0.05），IHC结果表明两组小胶质细胞有所恢复。结论 温阳解郁方的综合疗效和药理作用优于温阳方和解郁方，其作用机制可能通过抑制母婴分离/束缚应激小鼠海马小胶质细胞的激活，降低IL-1β，IL-6，TNF-α等细胞因子的表达，增加海马GR表达，从而改善小鼠的焦虑抑郁样行为。