加味升降散调控HIF-1α/NOX4信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激和凋亡的影响

目的 探讨加味升降散对膜性肾病（MN）大鼠血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）信号通路的干预作用，研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制。方法 采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）尾静脉注射方法复制MN模型，将成功造模的大鼠随机分为模型组，加味升降散组和贝那普利组。各组根据相应的药物剂量灌胃（ig），每日1次。在给药的第4周末检测相关指标，检测24 h尿蛋白（UTP），尿素氮（BUN），肌酐（SCr）的变化情况，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），活性氧（ROS）水平，原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠肾组织细胞凋亡率，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾脏中HIF-1α，NOX4的mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾脏HIF-1α，NOX4蛋白表达水平，免疫组化（IHC）检测大鼠肾脏相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2），B细胞淋巴瘤-xl（Bcl-xl），Bcl-2相关X蛋白（Bax），Bcl-2细胞死亡调节子抗体（Bim）蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠UTP明显上升（P<0.05），SOD水平明显减少，MDA，ROS明显增多（P<0.05），HIF-1α，NOX4的mRNA及蛋白表达水平明显上升（P<0.05），Bax，Bim蛋白表达水平明显增高，Bcl-xl，Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05），肾组织细胞凋亡显著增多；与模型组比较，各给药组大鼠UTP水平均有不同程度下降（P<0.05），SOD水平明显上调，MDA，ROS含量显著下降（P<0.05），HIF-1α，NOX4的mRNA及蛋白表达量明显下降（P<0.05），Bax，Bim蛋白表达水平下降，Bcl-xl，Bcl-2蛋白表达水平明显上升（P<0.05），肾组织细胞凋亡显著减少。结论 加味升降散的保肾作用可能与其通过抑制HIF-1α/NOX4通路，缓解MN大鼠肾组织氧化应激状态，减少肾组织细胞凋亡有关。