基于p53/AMPK信号通路观察益气扶正解毒汤对A549细胞自噬水平和生长的影响

目的 探讨益气扶正解毒汤对A549细胞自噬水平和生长的作用及机制。方法 制备益气扶正解毒汤含药血清干预A549肺癌细胞。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3），自噬关键分子酵母Atg6同系物1（Beclin1），p62，p53蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK），磷酸化AMPK（p-AMPK），哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白的水平，免疫荧光（IF）检测微管相关蛋白1A/1B轻链3B（MAP1LC3B）蛋白水平，5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EDU）染色、侵袭实验（Transwell）和β-半乳糖苷酶染色分别检测含药血清对细胞增殖、侵袭、衰老情况的影响；设置自噬抑制剂甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol·L^-1）干预组，即分为10%胎牛血清组（空白组），10%正常血清组（正常组），10%含药血清低、中、高剂量组，10%高剂量含药血清加3-MA（高剂量+3-MA）组，检测各组细胞增殖、侵袭、衰老水平；并设置p53抑制剂（PFT-α， 10 μmol·L^-1）组，即分为正常组，PFT-α组，高剂量组，高剂量+PFT-α组，检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ，Beclin1表达水平和MAP1LC3B免疫荧光强度及各组细胞增殖、侵袭、衰老的情况。结果 与空白组、正常组比较，干预A549细胞48 h，益气扶正解毒汤中、高剂量组LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平呈剂量依赖性升高（P<0.01）；益气扶正解毒汤低、中、高剂量组p62，p-mTOR/mTOR蛋白下降（P<0.05，P<0.01），p53，p-AMPK/AMPK蛋白表达升高（P<0.01）；益气扶正解毒汤低、中、高剂量组A549细胞增殖、侵袭数量明显降低，细胞衰老数量显著增多（P<0.01），同时MAP1LC3B免疫荧光强度增强，且益气扶正解毒汤高剂量组效果最佳；与益气扶正解毒汤高剂量组比较，益气扶正解毒汤高剂量+3-MA组、益气扶正解毒汤高剂量+PFT-α组发生增殖、侵袭的细胞数量均增加，而发生衰老的细胞数量明显减少（P<0.05，P<0.01），同时，高剂量+PFT-α组的MAP1LC3B免疫荧光强度减弱及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ，Beclin1蛋白表达水平降低（P<0.05，P<0.01）。结论 益气扶正解毒汤可经p53/AMPK信号通路上调A549细胞自噬水平，进而抑制A549细胞增殖、侵袭迁移，促进细胞衰老，在抑制肺癌进展中具有重要作用。