从乳腺癌微环境外泌体串扰角度探讨疏肝益肾方对他莫昔芬耐药细胞株的影响

目的 探讨疏肝益肾方（SGYS）通过干预乳腺癌微环境中外泌体的串扰对他莫昔芬（TAM）耐药细胞株LCC9的影响。方法 分别制备空白组，TAM（2 mg·kg^-1·d^-1）组，SGYS（113.2 g·kg^-1·d^-1）组，联合组共4组含药血清；采用超速离心法提取LCC9细胞的外泌体，并应用透射电子显微镜，纳米粒子追踪技术及蛋白免疫印迹法（Western blot）对其进行鉴定。然后将收集的LCC9外泌体（LCC9-EXO）与骨髓间充质干细胞（BMMSCs）共培养，在共培养体系中分别加入10%的上述4组含药血清。共培养48 h后，提取BMMSCs的外泌体（BMMSCs-EXO），与LCC9细胞进一步孵育。应用荧光显微镜观察细胞对外泌体的摄取情况，细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）法检测各组含药血清对LCC9细胞增殖的影响，流式细胞仪分析各组含药血清对LCC9细胞凋亡的影响，Transwell观察各组含药血清对LCC9细胞迁移的影响，Western blot检测各组CD24，CD44，人类表皮生长因子受体2（HER2），雌激素受体α（ERα）蛋白的表达。结果 荧光显微镜观察到LCC9-EXO可以被BMMSCs成功摄取，且BMMSCs-EXO可以被LCC9细胞成功摄取；CCK-8检测细胞增殖结果显示，与TAM组相比，SGYS组和联合组的细胞增殖能力在各时间段均明显降低（P<0.05），联合组较SGYS组降低更明显（P<0.05）；流式细胞仪检测凋亡结果显示，与TAM组相比，SGYS组和联合组的细胞凋亡水平明显升高（P<0.05）；Transwell迁移结果显示，与TAM组相比，SGYS组与联合组的细胞迁移能力明显降低（P<0.05）。Western blot结果显示，与TAM组相比，SGYS组与联合组的ERα和CD24表达量均明显上调（P<0.05），HER2和CD44的表达量均明显下调（P<0.05），且联合组对蛋白表达量的影响优于SGYS组（P<0.05）。结论 SGYS通过干预BMMSCs-EXO与LCC9-EXO串扰，从而逆转LCC9细胞的TAM耐药性。