龙胆苦苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠急性肝损伤的作用

目的 探究龙胆苦苷（GPS）对四氯化碳（CCl₄）诱导的急性肝损伤小鼠模型是否有保肝疗效及其对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 将60只小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常组、模型组、水飞蓟素（150 mg·kg^-1）组及GPS高、中、低剂量组（200，100，50 mg·kg^-1）。给药组的小鼠按10 mL·kg^-1灌胃处理，正常组和模型组灌胃相同量的蒸馏水，每天1次，连续灌胃给药10 d后，除正常组腹腔注射花生油（10 mL·kg^-1），其余各组腹腔注射0.12% CCl₄花生油（10 mL·kg^-1）溶液建立小鼠急性肝损伤模型。腹腔注射后禁食16 h，摘除小鼠眼球取血，收集肝脏组织。苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理学改变。生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST），总胆红素（TBIL），碱性磷酸酶（ALP），总超氧化物歧化酶（T-SOD），γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）的水平，肝组织中丙二醛（MDA），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平；酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠肝脏组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），白细胞介素-6（IL-6）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝脏组织中TLR4，MyD88，NF-κB蛋白表达情况；免疫组化检测磷酸化NF-κB（p-NF-κB）的表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠的ALT，AST，ALP，TBIL，γ-GT及MDA水平显著升高（P<0.01），T-SOD，GSH-Px活性显著降低（P<0.01）；与模型组比较，GPS中、高剂量组小鼠的ALT，AST，ALP，TBIL，γ-GT及MDA水平降低（P<0.05，P<0.01），T-SOD、GSH-Px活性明显上升（P<0.05，P<0.01）；与正常组比较，模型组小鼠肝组织中TNF-α，IL-1β，IL-6含量显著升高（P<0.01），TLR4，MyD88，p-NF-κB蛋白表达显著上升（P<0.01）；与模型组比较，GPS中、高剂量组小鼠肝组织中TNF-α，IL-1β，IL-6含量明显降低（P<0.05，P<0.01），TLR4，MyD88，p-NF-κB蛋白表达明显下调（P<0.05，P<0.01）。结论 GPS对CCl₄引起的急性肝损伤小鼠具有一定的保肝效果，其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及减弱氧化应激反应相关。