通窍活血汤通过调节星形胶质细胞Glu-Gln循环降低Glu兴奋性毒性改善CIRI大鼠的神经功能

目的 观察并比较3种不同方法制备的通窍活血汤对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠的保护作用，并从星形胶质细胞谷氨酸（Glu）代谢通路探讨其作用机制。方法 选用SPF级雄性SD大鼠，以改良线栓法建立CIRI模型，将造模成功的大鼠随机分为模型组、通窍活血汤水煎组、通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤醇提组，并设假手术组，分别给予对应药物灌胃，连续治疗7 d。通窍活血汤3个组的灌胃剂量为6.3 g·kg^-1·d^-1，假手术组和模型组给予同体积生理盐水灌胃。末次灌胃结束后，以神经功能缺损评分（mNSS）检测大鼠神经功能恢复情况，苏木素-伊红（HE）染色观察缺血脑组织的形态学变化，高效液相色谱法（HPLC）检测大鼠缺血脑组织中Glu含量的变化，免疫组织荧光法检测缺血脑组织中谷氨酸转运体-1（GLT-1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及谷氨酰胺合成酶（GS）和GFAP的共表达情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血脑组织中GFAP，GLT-1和GS蛋白的表达情况。结果 与假手术组比较，模型组大鼠mNSS评分显著升高（P<0.01），缺血脑组织皮质大片坏死，细胞排列紊乱、边界模糊，出现细胞水肿及炎性浸润；缺血脑组织中Glu的含量显著增加（P<0.01），GLT-1与GFAP共表达及GS与GFAP共表达显著降低（P<0.01），GFAP蛋白表达显著升高（P<0.01），GLT-1，GS蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，3种方法制备的通窍活血组mNSS评分均显著降低（P<0.01），大鼠缺血脑组织皮质及海马神经细胞的损伤程度均有所减轻；缺血脑组织中Glu的含量均明显减少（P<0.05，P<0.01），GLT-1与GFAP共表达均明显升高（P<0.05，P<0.01），GFAP，GLT-1蛋白表达均明显升高（P<0.05，P<0.01），通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤醇提组GS与GFAP共表达明显增加（P<0.05，P<0.01），GS蛋白的表达显著升高（P<0.01）。与通窍活血汤水煎组比较，通窍活血汤醇提组GLT-1和GFAP共表达及GS和GFAP共表达明显增加（P<0.05），通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤醇提组GS蛋白表达明显升高（P<0.05），通窍活血汤醇提组Glu含量显著降低（P<0.01），GFAP，GLT-1蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与通窍活血汤酒煎组比较，通窍活血汤醇提组GFAP，GLT-1蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 3种方式制备的通窍活血汤皆可改善CIRI大鼠的神经功能，其作用可能通过促进星形胶质细胞的进一步活化，增加GLT-1和GS表达，促进星形胶质细胞通过Glu-Gln循环清除突触间隙中Glu的过度堆积，降低Glu兴奋性毒性作用而实现。通窍活血汤醇提组在降低缺血脑组织Glu含量、促进星形胶质细活化、增强GLT-1和GS蛋白表达方面优于通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤水煎组。

Tongqiao Huoxuetang Improves Neurological Deficits in CIRI Rats by Regulating Glu-Gln Circulation to Reduce Glutamate Excitotoxicity of Astrocytes