哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

目的 研究哈蟆油蛋白酶解物（ORPH）对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法 复合酶解法制备ORPH，以400 mmol·L^-1乙醇建立L-02肝细胞损伤模型，细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化，JC-1/Hochest染色观察形态学变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化，研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。结果 CCK-8法结果表明400 mmol·L^-1乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤；与空白组比较，模型组L-02细胞活力显著下降（P<0.01），细胞处于G₀/G₁期的细胞占比显著升高（P<0.01），细胞总凋亡率显著升高（P<0.01），线粒体膜电位下降；B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），细胞色素C（Cyt C），半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）凋亡相关蛋白的表达明显升高（P<0.05，P<0.01），MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK），p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）明显上调（P<0.05，P<0.01），且焦亡蛋白Caspase-1，白细胞介素-1β（IL-1β）表达明显增强（P<0.05），Bcl-2显著下降（P<0.01）；与模型组比较，ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善（P<0.05，P<0.01），细胞总凋亡率显著下降（P<0.01），线粒体膜电位升高，呈剂量相关性；Bax，Cyt C，Caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01），MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（P<0.05，P<0.01）。结论 ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤，改善恢复线粒体膜电位，降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达，并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达，从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激，对酒精性肝损伤起到治疗作用。

Effect of Ranae Oviductus Protein Hydrolysate on Ethanol-induced L-02 Cell Injury