| 人肝细胞生长因子基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究 |
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| 引用本文： | 朱月蓉,邢继成,韩萍,邱红. 人肝细胞生长因子基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究[J]. 江苏大学学报(医学版), 2009, 19(4): 324-327,341,I0002 |
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| 作者姓名： | 朱月蓉 邢继成 韩萍 邱红 |
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| 作者单位： | 1. 南京军区第八一医院生化科,江苏,南京,210002
2. 南京禄口国际机场卫生科,江苏,南京,210029 |
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| 摘 要： | 目的: 构建含人肝细胞生长因子(hHGF)基因的骨髓间充质干细胞(MSCs),获得高表达hHGF的MSCs.方法: 构建含hHGF基因的腺病毒表达载体pDC316-HGF-IRES-EGFP.同源重组法获得含hHGF的重组腺病毒Ad-HGF.以仅表达GFP基因的重组腺病毒Ad-GFP为对照,体外分别以Ad-GFP, Ad-HGF感染MSCs.荧光激活细胞分选术检测受染细胞的基因表达效率.酶联免疫吸附测定法检测转导细胞培养上清中hHGF表达的浓度和持续时间.结果: 腺病毒表达载体经限制性内切酶切后有2.2 kb的hHGF目的基因片段和5.2 kb的线性化载体片段;目的片段测序结果与基因库中hHGF cDNA序列一致.病毒液Ad-HGF纯化后滴度可以达到8.02×1010 pfu/ml.FACS检测HGF/MSCs的GFP阳性率达95.19%.HGF/MSCs细胞培养上清中hHGF能持续表达至少14 d;最高浓度达到99 ng/ml.结论: 本实验中腺病毒表达载体构建正确;重组腺病毒液Ad-HGF滴度高;转导后在MSCs中获得高效、稳定和持续表达的hHGF.该载体达到实验设计要求,为进一步的体内外研究提供了实验依据.
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| 关 键 词： | 间充质干细胞 肝细胞生长因子 腺病毒载体 |
Construction of hepatocyte growth factor expression vector system and expression in rat bone marrow mesenchymal stem cells |
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| ZHU Yue-rong,XING Ji-cheng,HAN Ping,QIU Hong. Construction of hepatocyte growth factor expression vector system and expression in rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Journal of Jiangsu University Medicine Edition, 2009, 19(4): 324-327,341,I0002 |
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| Authors: | ZHU Yue-rong XING Ji-cheng HAN Ping QIU Hong |
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