原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究 |
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引用本文: | 高红伟,李素波,鲍国强,檀英霞,王玲燕,金泗虎,王颖丽,季守平,宫锋.原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究[J].中国实验血液学杂志,2011,19(2):503-507. |
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作者姓名: | 高红伟 李素波 鲍国强 檀英霞 王玲燕 金泗虎 王颖丽 季守平 宫锋 |
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作者单位: | 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 |
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摘 要: | 本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造.在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化.利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞.结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D(600)为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时.纯化后α-丰乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg.该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞.结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶.
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关 键 词: | 基因重组α-半乳糖苷酶 血型改造 B→O血型改造 |
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