人脑胶质瘤特异抗原肽白介素13α2受体的原核表达

目的：构建白介素13α2受体 （Interleukin-13α2 Receptor， IL-13Rα2） 基因的表达质粒， 并检测其在体外原核表达情况，为脑胶质瘤的免疫治疗奠定基础。方法： 用RT-PCR技术从U251胶质瘤细胞株扩增IL-13Rα2基因， 并与克隆质粒pMD19 Sim?ple T载体连接转入DH5α菌克隆， 筛选重组阳性菌落， 用Xho I和Hind Ⅲ将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒pET-28a连接， 转入BL21 （DE3） 菌， 提取重组质粒进行酶切及测序鉴定正确后， 在IPTG诱导下原核表达IL-13Rα2抗原肽，并利用镍柱进行纯化回收， SDS-PAGE检测表达蛋白。结果： 成功扩增出IL-13Rα2基因序列， 大小为1 142 bp， 并表达纯化出IL-13Rα2抗原肽， 大小为60 kD， 于诱导第3 h表达量最高， 以包涵体形式表达。结论： IL-13Rα2基因表达质粒能在体外成功构建， 并能在IPTG诱导下成功表达及纯化得到IL-13Rα2抗原肽。