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| has-miR-223表达载体构建及其对靶基因ARTN的调控 | |
| 引用本文： | 吴文新,陈彦亮,刘增良,和宇峥,崔爱荣,李书军.has-miR-223表达载体构建及其对靶基因ARTN的调控[J].中国肿瘤临床,2011,38(9). |
| 作者姓名： | 吴文新 陈彦亮 刘增良 和宇峥 崔爱荣 李书军 |
| 作者单位： | 1. 河北医科大学第二医院病理科,石家庄市,050051 2. 河北省涉县医院 3. 河北省涉县医院胸外科 |
| 摘 要： | 目的:构建hsa-miR-223真核表达载体,并在人食管癌细胞KYSE-150中验证hsa-miR-223对靶基因artemin(ARTN)的调控作用.方法:以基因组DNA为模板,RT-PCR扩增包括hsa-miR-223前体序列在内的基因序列,并将其克隆到载体pCD?NA3.1(+)上,通过实时定量PCR方法检测hsa-miR-223在人胚肾HEK293细胞中的表达.根据生物信息学预测软件TargetScan、mirBase和PicTar对hsa-miR-223靶基因进行预测,将靶基因ARTN的3'UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测hsa-miR-223 对靶基因ARTN 的3'UTR 区的调控作用.将pCDNA3.1-miR-223 表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测对ARTN蛋白表达的影响.结果:成功构建hsa-miR-223表达载体pCDNA3.1-miR-223.实时定量PCR 验证表明pCDNA3.1-miR-223 在人胚肾HEK293 中能够明显地过表达成熟miR-223.生物信息学预测ARTN 是hsa-miR-223的靶基因,并构建融合ARTN的3'UTR区表达质粒pMIR-ARTN,在此基础上对ARTN的3'UTR"种子区"进行定点突变.双荧光素酶报告基因分析表明hsa-miR-223能够作用于ARTN的3'UTR.Western blot法进一步证实ARTN是miR-223的靶基因.结论:hsa-miR-223作用于ARTN的3'UTR可在转录后水平上调控ARTN蛋白的表达. |
| 关 键 词： | 真核表达载体 报告基因 |
Construction of miR-223 Expression Vector and Its Regulation to Target Gene Artemin |
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| Wenxin WU,Yanliang CHEN,Zengliang LIU,Yuzheng HE,Airong CUI,Shujun LI.Construction of miR-223 Expression Vector and Its Regulation to Target Gene Artemin[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2011,38(9). | |
| Authors: | Wenxin WU Yanliang CHEN Zengliang LIU Yuzheng HE Airong CUI Shujun LI |
| Abstract: | |
| Keywords: | hsa-miR-223 |
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