β-半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒(AAV-2)载体的构建及其在哺乳类细胞中的表达 |
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引用本文: | 张桐,王文亮,王伯云, 杨新科,颜子颖,段淑敏,候云德.β-半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒(AAV-2)载体的构建及其在哺乳类细胞中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,1996(4). |
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作者姓名: | 张桐 王文亮 王伯云 杨新科 颜子颖 段淑敏 候云德 |
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作者单位: | 第四军医大学病理学教研室,中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室 |
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摘 要: | 以野生型2型人类腺伴随病毒(AAV-2)全基因组载体(pSSV9和pSSV9-int-)为基础,构建了重组AAV载体pSSV9/P40-LacZ(+)和pSSV9/P40-LacZ(-),制备AAV重组病毒,感染宿主细胞后表达了β-半乳糖苷酶基因。此外,用脂质体转染法将载体导入293细胞和A549细胞,进行了LacZ基因瞬时表达研究。结果显示,重组AAV载体(PSSV9/P40-LacZ(+))LacZ基因表达的动态变化特点是,转染后表达较早(12~24h)出现,并迅速达到高峰值(经24h),随后较快下降(经48~72h)并维持在较低水平。将启动子附近itr结构有差别的上述两载体转染宿主细胞72h后做表达水平比较,结果pSSV9/P40-LacZ(-)在293细胞和A549细胞中,LacZ表达水平均高于pSSV9/P40-LacZ(+)(1.2倍~1.4倍),提示启动子附近AAVitr结构的变异对表达有一定的影响。
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关 键 词: | 腺伴随病毒,载体构建,β-半乳糖苷酶基因,表达 |
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