脂质体转染bcl-2反义核酸对HL-60细胞凋亡的影响

目的人白血病细胞系ＨＬ－６０细胞高表达凋亡抑制基因ｂｃｌ－２蛋白，是研究细胞增殖、凋亡的良好模型。通过脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸，观察其对细胞增殖的抑制，对ｂｃｌ－２蛋白表达影响，及诱导细胞凋亡出现。方法ＨＬ－６０细胞在３７℃、５％ＣＯ２条件下，培养于含１５％小牛血清及含青、链霉素（每毫升各１００Ｕ）的ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中，细胞接种密度为１０７／Ｌ，反义核酸终浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，反义核酸与脂质体比例为１．０ＯＤ：５０μｌ。脱离小牛血清转染２４ｈ，同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体＋无义组，再连续培养４天，做免疫组化，检测ｂｃｌ－２蛋白表达。提取总ＲＮＡ，行ＲＴ－ＰＣＲ分析ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达，以及透射电镜检查，观察细胞凋亡情况及脂质体转染情形。结果脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０细胞增殖，在转染后第五天最明显，经统计学处理，反义组与空白及无义对照组有显著性差别，脂质体转染反义核酸组与其余组均有统计上显著性差别。（２）降低ｂｃｌ－２蛋白表达水平，处理前ｂｃｌ－２免疫组化阳性率为６２±１．４８％，经转染ｂｃｌ－２反义核酸处理后，ｂｃｌ－２表达率为３２．５±１．