| 人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 赵秀玲,张梅,何金生,付远辉. 人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定[J]. 安徽医科大学学报, 2012, 47(8): 895-899 |
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| 作者姓名： | 赵秀玲 张梅 何金生 付远辉 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学免疫学教研室,合肥,230032;北京交通大学生命科学与生物工程研究院,北京,100044 |
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| 摘 要： | 目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT。设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P。同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L。用重组质粒转染BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达。结论获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人呼吸道合胞病毒 核蛋白 磷蛋白 转录延长/终止抑制因子M2-1 大蛋白 |
Construction and identified of N,P,L and M2-1 of human respiratory syncytial virus RNA polymerase complex |
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| Affiliation: | Zhao Xiuling1,Zhang Mei1,He Jinsheng2,et al(1Dept of Immunology,Anhui Medical University,Hefei 230032; 2College of Life Sciences & Bioengineering,Beijing Jiaotong University,Beijing 100044) |
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