| 人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 张斌,单志新,林秋雄,周志凌,邓春玉,郭爱林,符永恒,谭虹虹,余细勇. 人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定[J]. 中国病理生理杂志, 2007, 23(7) |
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| 作者姓名： | 张斌 单志新 林秋雄 周志凌 邓春玉 郭爱林 符永恒 谭虹虹 余细勇 |
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| 作者单位： | 广东省心血管病研究所 广东广州510080(张斌)，广东省人民医院医学研究中心 广东广州510080(单志新，林秋雄，周志凌，邓春玉，郭爱林，符永恒，谭虹虹，余细勇) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建人miR-133a重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)中的表达。方法:从人基因组DNA中扩增包含miR-133a的PCR产物,并定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经pmeⅠ线性化的重组穿梭载体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒rAd-mir-133a。将rAd-mir-133a在人胚肾293细胞(HEK293)中包装并扩增出miR-133a的重组腺病毒。将重组腺病毒感染hMSCs,利用RT-PCR和实时定量PCR分别检测初级miR-133a和成熟miR-133a的表达。结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果显示,重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-133a构建正确。在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-133a。rAd-miR-133a感染的hMSCs中初级miR-133a转录子和成熟miR-133a表达显著增强。结论:成功构建了人miR-133a重组腺病毒,并在hMSCs中高效表达出miR-133a,为进行miR-133a的功能研究创造条件。
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| 关 键 词： | 微小RNA 载体构建 骨髓间质干细胞 腺病毒 |
Construction of recombinant adenovirus vector carrying human miR-133a and its expression in vitro |
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| ZHANG Bin,SHAN Zhi-xin,LIN Qiu-xiong,ZHOU Zhi-ling,DENG Chun-yu,GUO Ai-lin,FU Yong-heng,TAN Hong-hong,YU Xi-yong. Construction of recombinant adenovirus vector carrying human miR-133a and its expression in vitro[J]. Chinese Journal of Pathophysiology, 2007, 23(7) |
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| Authors: | ZHANG Bin SHAN Zhi-xin LIN Qiu-xiong ZHOU Zhi-ling DENG Chun-yu GUO Ai-lin FU Yong-heng TAN Hong-hong YU Xi-yong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | microRNA Vector construction Bone marrow mesenchymal stem cells Edenovirus |
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