| COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响 |
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| 引用本文： | 李爱清,姒健敏,商燕,甘丽红,郭磊,周天华. COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响[J]. 浙江大学学报(医学版), 2010, 39(3). DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.03.008 |
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| 作者姓名： | 李爱清 姒健敏 商燕 甘丽红 郭磊 周天华 |
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| 作者单位： | 1. 浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室,浙江,杭州,310016
2. 浙江大学医学院疾病模拟中心,浙江,杭州,310058 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划 (863计划) 项目资助 |
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| 摘 要： | 目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响.方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM 4.1- CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株.通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化.结果:序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体.实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05).结论:COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移.
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| 关 键 词： | 胃肿瘤/病理学 胶原Ⅰ型/遗传学 RNA干扰 受体,CXCR4/遗传学 转录 遗传 遗传载体 |
Construction of COL1A1 short hairpin RNA vector and its effect on cell proliferation and migration of gastric cancer cells |
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| LI Ai-qing,SI Jian-min,SHANG Yan,GAN Li-hong,GUO Lei,ZHOU Tian-hua. Construction of COL1A1 short hairpin RNA vector and its effect on cell proliferation and migration of gastric cancer cells[J]. Journal of Zhejiang University. Medical sciences, 2010, 39(3). DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.03.008 |
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| Authors: | LI Ai-qing SI Jian-min SHANG Yan GAN Li-hong GUO Lei ZHOU Tian-hua |
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