| 摘 要： | 目的构建人血管生成素-2(Ang-2)短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,观察其在内质网应激(ERS)状态下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响,探讨Ang-2基因在ERS状态下介导血管内皮细胞凋亡的作用和机制。方法采用DNA重组技术根据人Ang-2mRNA序列设计并合成2条shRNA寡核苷酸片段,构建表达质粒并通过脂质体介导转染HUVECs,对Ang-2基因进行RNA沉默,采用RT-PCR和Western blot分别检测Ang-2在ERS状态下mRNA及蛋白质的表达。结果经双酶切和测序鉴定证实,2个shRNA表达载体均构建成功。与空白对照、阴性对照组相比,Ang2-1-shRNA、Ang2-2-shRNA组HUVECs中Ang-2基因mRNA及蛋白表达水平均降低,其中,Ang2-1-shRNA干扰效果最强。Ang-2mRNA和蛋白的抑制率分别达79.29%、68.21%。沉默Ang-2基因可增加ERS状态下HUVECs细胞活力及抑制其凋亡。结论成功构建靶向Ang-2基因的shRNA真核表达载体,Ang-2基因沉默对ERS状态下HUVECs凋亡有抑制作用。Ang-2基因可抑制血管内皮细胞体外增殖,增强ERS状态下HUVECs凋亡。
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