LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

摘 要　目的：从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAM high特异表型的结肠癌干细胞样细胞，观察其生物学行为，证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法：从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAM high表型的细胞，接种于添加生长因子的无血清培养基中，观察其增殖过程，继而诱导分化。MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAM high、EPCAM low和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布。3种细胞接种裸鼠，比较不同细胞的成瘤率；免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAM high细胞中 CD44/EPCAM的表达。结果：LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAM high细胞，并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长，且可连续传代；在血清的诱导下，呈贴壁分化生长，其形态与未分选LoVo细胞无差别。CD44+/EPCAM high细胞增殖能力高于EPCAM low细胞及未分选LoVo细胞，且细胞周期多集中在G0/G1期。以500个CD44+/EPCAM high细胞接种裸鼠成瘤率为90%（9/10），而1×104个EPCAM low细胞成瘤率为0（0/10)。小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAM high细胞仍能少量表达CD44和EPCAM。结论：LoVo细胞中存在CD44+/EPCAM high结肠癌干细胞样细胞，CD44+/EPCAM high可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究。

Isolation, culture and identification of colon cancer stem-like cells from LoVo cell line