狼疮性肾炎肾阴虚证DNA消减文库的构建 |
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作者姓名: | 付婷婷 罗仁 赵晓山 罗云坚 崔丽娟 李嘉 |
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作者单位: | [1]第一军医大学南方医院中医科 [2]广东省中医院内二科,广州510515 |
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摘 要: | 目的:采用抑制性消减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)构建狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)肾阴虚证DNA消减文库。方法:选择汉族人LN中医辨证为肾阴虚证患者以及正常人作为其对照组,用硅胶法抽提血白细胞DNA,经过酶切、接头连接、两次抑制性消减杂交及抑制、巢式PCIR后,将PCIR产物与A载体连接,经蓝白斑筛选,再用PCIR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建LN肾阴虚证DNA消减文库。结果:用SSH方法筛选出了LN肾阴虚证的差异DNA片段,得到581个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DN肾阳虚证的DNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建LN肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆LN肾阴虚证相关基因奠定了基础,亦为寻找肾虚证相关基因提供重要线索。
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关 键 词: | 狼疮性肾炎 肾阴虚证 抑制性消减杂交 DNA消减文库 |
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