狼疮性肾炎肾阴虚证DNA消减文库的构建

目的：采用抑制性消减杂交技术(Suppression subtractive hybridization，SSH)构建狼疮性肾炎(lupus nephritis，LN)肾阴虚证DNA消减文库。方法：选择汉族人LN中医辨证为肾阴虚证患者以及正常人作为其对照组，用硅胶法抽提血白细胞DNA，经过酶切、接头连接、两次抑制性消减杂交及抑制、巢式PCIR后，将PCIR产物与A载体连接，经蓝白斑筛选，再用PCIR方法插入片段筛选出阳性重组质粒，构建LN肾阴虚证DNA消减文库。结果：用SSH方法筛选出了LN肾阴虚证的差异DNA片段，得到581个白色克隆，再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒，从而成功地构建了DN肾阳虚证的DNA消减文库。结论：SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建LN肾阴虚证DNA消减文库，为进一步筛选和克隆LN肾阴虚证相关基因奠定了基础，亦为寻找肾虚证相关基因提供重要线索。