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| 睾丸肿瘤抗原MAGE-C2基因cDNA的克隆、表达与纯化 | |
| 引用本文： | 王莉,郭爱林,李青,吴成利,秦叔逵,王琳.睾丸肿瘤抗原MAGE-C2基因cDNA的克隆、表达与纯化[J].实用肿瘤杂志,2005,20(2):140-143. |
| 作者姓名： | 王莉 郭爱林 李青 吴成利 秦叔逵 王琳 |
| 作者单位： | 1. 中国人民解放军八一医院全军肿瘤中心内科,江苏,南京,210002 2. 中山医科大学病理教研室,广东,广州,510080 3. 第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710033 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助，No.30 10 0 2 18 |
| 摘 要： | 目的 克隆人睾丸肿瘤抗原MAGE- C2基因的c DNA,并在大肠杆菌中进行表达与纯化,以便为研究其生物学功能及制备肿瘤疫苗奠定基础。方法 从人胶质瘤细胞系BT- 32 5中提取总RNA,用RT- PCR从中扩增出MAGE- C2的c DNA片段,将MAGE- C2的c DNA片段插入载体p GEM- T easy中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体p GEX- 4 T- 2中,构建重组表达载体p GEX- 4 T- 2 - MAGE- C2 ,并转化大肠杆菌,用IPTG进行诱导后,收集细菌,菌体裂解后,利用GST亲和层析柱对表达蛋白进行纯化,并进行SDS- PAGE及Western- blot检测。结果 从人胶质瘤细胞系BT- 32 5中克隆到长4 0 0 bp的MAGE- C2的c DNA,测序正确;经Xho I和Bam H I酶切鉴定证实,MAGE- C2 c DNA成功克隆到表达载体p GEX- 4 T- 2中;构建的表达载体p GEX- 4 T- 2 - MAGE- C2在大肠杆菌中表达出Mr4 10 0 0的融合蛋白,经谷胱甘肽(GST)亲和层析后的融合蛋白纯度达到90 % ,该融合蛋白具有MAGE- C2抗原特性。结论 成功地克隆并表达了MAGE- C2 c DNA,并对融合蛋白进行了初步纯化,为大规模获得MAGE- C2抗原创造了条件。 |
| 关 键 词： | 睾丸肿瘤/免疫学 基因表达 抗原 肿瘤/遗传学 克隆 分子 大肠杆菌/遗传学 |
| 文章编号： | 1001-1692(2005)02-0140-04 |
| 修稿时间： | 2004年7月19日 |
Cloning,expression and purification of human testicular carcinoma antigen MAGE-C2 cDNA |
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