| MHC-Ⅰ类链相关基因A真核表达载体的构建及稳定转染舌鳞癌细胞的实验研究 |
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| 引用本文： | 李超,杨丹,石芳琼,李跃辉,陈新群,翦新春,蒋灿华.MHC-Ⅰ类链相关基因A真核表达载体的构建及稳定转染舌鳞癌细胞的实验研究[J].华西口腔医学杂志,2011,29(4). |
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| 作者姓名： | 李超 杨丹 石芳琼 李跃辉 陈新群 翦新春 蒋灿华 |
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| 作者单位： | 1. 中南大学湘雅医院,口腔颌面外科
2. 中南大学,肿瘤研究所,长沙,410078 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30772437); 湖南省科技计划一般基金资助项目(06sk3026) |
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| 摘 要： | 目的构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系。方法采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1,构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA,脂质体法转染Tca8113-Tb细胞,G418筛选,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系,RT-PCR、real time PCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达。结果通过PCR技术获取了MICA基因并成功克隆入载体,测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达,RT-PCR、real time PCR及免疫细胞化学检测到目的基因MICA在转染细胞中为过表达。结论 pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础。
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| 关 键 词： | MHC-Ⅰ类链相关基因A Tca8113-Tb细胞系 质粒构建 基因转染 |
Construction of eukaryotic expression vector of major histocompatibility complex class Ⅰ-related chain A and establishment of its stable transfected Tca8113-Tb cell line |
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| Li Chao,Yang Dan,Shi Fangqiong,Li Yuehui,Chen Xinqun,Jian Xinchun,Jiang Canhua.Construction of eukaryotic expression vector of major histocompatibility complex class Ⅰ-related chain A and establishment of its stable transfected Tca8113-Tb cell line[J].West China Journal of Stomatology,2011,29(4). |
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| Authors: | Li Chao Yang Dan Shi Fangqiong Li Yuehui Chen Xinqun Jian Xinchun Jiang Canhua |
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| Institution: | Li Chao1,Yang Dan1,Shi Fangqiong1,Li Yuehui2,Chen Xinqun1,Jian Xinchun1,Jiang Canhua1.(1.Dept.of Oral and Maxillofacial Surgery,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 410078,China,2.Cancer Research Institute,China) |
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| Abstract: | |
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