USP22参与雌激素受体α基因转录调控及其在血管钙化中的作用

目的 证实去泛素化酶USP22参与雌激素受体α(ERα)介导的基因转录调控进而在血管钙化中发挥重要作用。方法 将人主动脉平滑肌细胞(hASMC)分别接种于正常培养基、含1.25 mmol/L CAL、2.5 mmol/L CAL、5 mmol/L CAL的培养基中培养0、3、7、9天。用1%/2%茜素红染色,倒置相差显微镜观察钙化情况；在5 mmol/L CAL条件下培养0、3、7、9天,Western blot实验检测钙化相关蛋白骨形态发生蛋白2(BMP-2)、核因子κB的受体激活剂配体(RANKL)、环氧合酶2(COX-2)、vitk依赖的分泌性蛋白(Gas6)、ERα的蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验检测在hASMC中,USP22是否参与ERα介导的基因转录调控；过表达USP22,Western blot实验检测钙化相关因子BMP-2、RANKL、COX-2、Gas6和ERα的蛋白表达。结果 在1.25 mmol/L CAL条件下培养到第9天,hASMC有明显的钙沉积；在2.5 mmol/L CAL、5 mmol/L CAL条件下培养到第7天hASMC出现钙沉积,第9天有明显钙沉积。hASMC在5 mmol/L CAL培养条件下,RANKL、BMP-2、USP22蛋白表达增加。双荧光素酶报告基因实验检测结果表明,在hASMC中USP22抑制ERα介导的基因转录调控；Western blot实验结果显示,过表达USP22,ERα的下游基因Gas6蛋白表达减少。结论 在5 mmol/L CAL培养的条件下,hASMC钙化模型建立成功；USP22可能通过抑制ERα介导的下游基因Gas6的基因转录进而促进hASMC钙化。