RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制

目的 构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX-1）基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞。观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞损伤的保护机制。方法 针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列，合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干扰序列，测定滴度。转染人脐静脉内皮细胞96 h后，通过荧光显微镜观察转染效率，逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率。转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24 h；噻唑蓝比色法检测细胞存活率；硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮（NO）的含量；Western blot检测各组细胞间黏附分子1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、RhoA、Rho激酶1（ROCK1）、Rho激酶2（ROCK2）的表达。结果 测序结果证实，靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功，包装后慢病毒滴度为6×10¹¹ TU/L。转染组与未转染组比较，LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少（P<0.01）。与正常对照组相比，ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量，增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达（P<0.05）；与ox-LDL处理组相比，干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用（P<0.05）。结论 干扰LOX-1表达，对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用，起到对内皮细胞损伤的保护作用。本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据。

The Protective Mechanisms on the Injury of the Human Umbilical Vein Endothelial Cells Induced by Oxidized Low Density Lipoprotein with RNA Interference in the Expression of LOX-1