| 小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 陈锋,何生松,邱荣元,庞然,许娟娟,董继华. 小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达[J]. 世界华人消化杂志, 2009, 17(14) |
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| 作者姓名： | 陈锋 何生松 邱荣元 庞然 许娟娟 董继华 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科,湖北省武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,湖北省武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室,湖北省武汉市,430022 |
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| 摘 要： | 目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6 -shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW 264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.
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| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子受体相关因子6 RNA干扰 重组表达质粒 短发卡RNA |
Construction and expression of mouse TRAF6-shRNA eukaryotic expressing plasmid |
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| Feng Chen,Sheng-Song He,Rong-Yuan Qiu,Ran Pang,Juan-Juan Xu,Ji-Hua Dong. Construction and expression of mouse TRAF6-shRNA eukaryotic expressing plasmid[J]. World Chinese Journal of Digestology, 2009, 17(14) |
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| Authors: | Feng Chen Sheng-Song He Rong-Yuan Qiu Ran Pang Juan-Juan Xu Ji-Hua Dong |
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