儿童松质骨成骨细胞体外培养

目的 探讨儿童松质骨成骨细胞体外培养条件，为儿童骨组织工程研究选择种子细胞。方法 均取自先天性髋脱位患儿加盖手术时多余髂骨，术前证实患儿无代谢性骨病，未服激素类等药物。取材在手术时进行，男1例，女3例，年龄3～7岁。骨块保持无菌，置于无血清培养液中，4℃冰箱存放，2～4h内分离骨细胞。将髂骨松质骨剪碎成骨粒，经胰蛋白酶初步消化后，采用胶原酶Ⅱ分次消化法，获取原代成骨细胞，将原代成骨细胞置于含15％胎牛血清的DMEM-F12培养基中培养，经传代、纯化后，绘制细胞生长曲线。成骨细胞的鉴定采用改良Goraori碱性磷酸酶(ALP)钙钴法染色、ABC法Ⅰ、Ⅲ型胶原染色及放射免疫法测定骨钙素含量。培养期间应用倒置相差显微镜观察细胞形态。结果经酶消化法得到的儿童成骨细胞，呈梭形，较饱满。原代细胞胞体较小，传代后可呈多角形、梭形或不规则形，胞浆内可出现黑色颗粒。ALP染色阳性率45％。初次酶消化后的松质骨块经培养后，还可以多次消化得到更加纯化的成骨细胞。结论 采用胰蛋白酶及胶原酶的多次消化法获取原代细胞，经培养、传代后，可得到较为稳定、纯化的儿童松质骨成骨细胞。

Osteoblastic cells derived from spongy bone culture in vitro in children