A型口蹄疫病毒1D蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及电子显微镜检测

目的 本实验旨在表达出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白，并通过电子显微镜检测，以期望形成纳米样颗粒。 方法 根据A型口蹄疫病毒核酸序列，得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因，并进行截短和优化，共132个氨基酸；同时，从结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli）中分离得到135个氨基酸的铁蛋白(Fn)基因片段，将A型口蹄疫病毒1D蛋白与铁蛋白串联，设计并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-铁蛋白片段，命名为CcFnt166AS。构建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中，异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测，筛选出高可溶性表达的CcFnt166AS融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化，进行电子显微镜检测。 结果 成功构建9种CcFnt166AS表达载体；9个标签中，MBP与CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表达效果最好，并获得了高纯度的MBP-CcFnt166AS重组蛋白质；电子显微镜结果显示，MBP-CcFnt166AS形成了纳米样颗粒。 结论 本实验建立了稳定获得CcFnt166AS重组蛋白质的方法。