| 鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的高效表达 |
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| 引用本文： | 舒东,俞炜源,徐兵,刘斌,罗深秋.鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的高效表达[J].军事医学科学院院刊,1999(4). |
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| 作者姓名： | 舒东 俞炜源 徐兵 刘斌 罗深秋 |
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| 作者单位： | 第一军医大学生物学教研室!广州510515(舒东，徐兵)，军事医学科学院生物工程研究所!北京100071(俞炜源，刘斌，罗深秋) |
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| 基金项目： | 国家“863”计划资助 |
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| 摘 要： | 目的：构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶融合基因，并在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中高效表达。方法：应用重组ＤＮＡ 技术，将编码尿激酶原信号肽的ＤＮＡ 片段，与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶基因融合在一起，并插入真核表达载体ｐＭＪＫ３ 中，构建成重组质粒ｐＭＪＫ３Ｄ。通过细胞电击穿孔法，将该重组质粒转染到中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶基因缺陷株（ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－ ）中，转染细胞经选择培养基筛选，并采用ＭＴＸ加压扩增培养。结果：得到了高效表达融合蛋白的细胞株，表达水平为３００ Ｕ／（１０６ 细胞·ｄ）。通过ＥＬＩＳＡ 和溶解圈方法鉴定，该融合蛋白可与Ｄ－二聚体结合，并具有激活纤溶酶原溶解纤维蛋白的活性。结论：成功构建并获得高效表达双功能融合蛋白的细胞株，为进一步研究这一双功能融合蛋白的体内外特异溶栓活性以及评价其作为新型导向溶栓制剂奠定了基础。
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| 关 键 词： | 单链抗体 尿激酶 融合蛋白 CHO细胞 |
The high-level expression of mouse against human cross linked fibrin ScFv Scu PA 32K fusion protein in Chinese hamster ovary cells |
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| Shu Dong,Yu Weiyuan,Xu Bing,Liu Bin,Luo Shenqiu Institute of Biotechnology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing.The high-level expression of mouse against human cross linked fibrin ScFv Scu PA 32K fusion protein in Chinese hamster ovary cells[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,1999(4). |
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| Authors: | Shu Dong Yu Weiyuan Xu Bing Liu Bin Luo Shenqiu Institute of Biotechnology Academy of Military Medical Sciences Beijing |
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| Institution: | Shu Dong,Yu Weiyuan,Xu Bing,Liu Bin,Luo Shenqiu Institute of Biotechnology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ScFv urokinase fusion protein CHO cells |
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