细胞因子联合纹状体条件培养液定向诱导间充质干细胞体外分化为多巴胺能神经元

背景:在众多体外诱导间充质干细胞向多巴胺能神经元的诱导分化研究中,诱导阳性率仍不理想。目的:实验应用碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和纹状体条件培养液定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元,拟探讨提高诱导阳性率的方法。设计、时间及地点:以细胞为对象的对照观察细胞学实验,于2006-07/2007-12在山东大学齐鲁儿童医院和山东大学第二医院血液实验室完成。材料:健康成年Wistar大鼠用于骨髓间充质干细胞的分离,新生Wistar大鼠用于纹状体条件培养液的制备。方法:采用贴壁法分离纯化健康成年Wistar大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养。取出生24h内新生Wistar大鼠,完整剥离其大脑组织制备纹状体条件培养液。取体外培养的第5代间充质干细胞,用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的预诱导液进行预诱导,24h后去除预诱导液,换用纹状体条件培养液进行诱导。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态变化,并应用细胞免疫化学技术检测细胞内神经元特异烯醇化酶和酪氨酸羟化酶表达。结果:大鼠骨髓间充质干细胞经碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和纹状体条件培养液诱导后细胞胞体逐渐回缩成团,形成梭形,部分细胞可见突起伸出,类似神经元。细胞免疫化学检测,诱导后细胞神经元特异烯醇化酶阳性表达率为(72.70±14.81)%,酪氨酸羟化酶阳性表达率为(34.50±15.93)%。结论:应用碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子联合纹状体条件培养液诱导分化体系,获得了高比例的神经元,其中包括较多的多巴胺能神经元。

Cytokines combined with striatal conditioned medium to induce differentiation of mesenchymal stem cells into dopaminergic neurons in vitro