| 人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染 |
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| 引用本文： | 陈陵,李志宏,杨仕明,李晶晶,蔡永国,房殿春,罗元辉,王东旭. 人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染[J]. 第三军医大学学报, 2006, 28(1): 47-49 |
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| 作者姓名： | 陈陵 李志宏 杨仕明 李晶晶 蔡永国 房殿春 罗元辉 王东旭 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军消化内科中心,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6.方法采用基因重组技术,用EcoR I从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoR I酶切位点上,经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认.用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果.结果经BamH I酶切后,正义质粒形成5.3kb和1.7kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5kb和O.5kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性.转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.结论成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础.
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| 关 键 词： | 肝素酶 荧光真核表达载体 转染 |
| 文章编号： | 1000-5404（2006）01-0047-03 |
| 收稿时间： | 2005-09-11 |
| 修稿时间： | 2005-11-25 |
Construction of sense and antisense human heparanase and green fluorescent protein eukaryotic co-expression vectors and expression in hepatic cancer cell lines |
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| CHEN Ling,LI Zhi-hong,YANG Shi-ming,LI Jing-jing,CAI Yong-guo,FANG Dian-chun,LUO Yuan-hui,WANG Dong-xu. Construction of sense and antisense human heparanase and green fluorescent protein eukaryotic co-expression vectors and expression in hepatic cancer cell lines[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2006, 28(1): 47-49 |
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| Authors: | CHEN Ling LI Zhi-hong YANG Shi-ming LI Jing-jing CAI Yong-guo FANG Dian-chun LUO Yuan-hui WANG Dong-xu |
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| Affiliation: | Gastroenterology Research Center, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | heparanase fluorescent eukaryotic expression vector transfection |
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