| 人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化 |
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| 引用本文： | 张玲,高军,李兆申,杜奕奇,龚燕芳,黄文,金晶,吴洪玉,满晓华. 人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化[J]. 解放军医学杂志, 2009, 34(1) |
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| 作者姓名： | 张玲 高军 李兆申 杜奕奇 龚燕芳 黄文 金晶 吴洪玉 满晓华 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433;第二军医大学长海医院消化病研究所,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的 在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定.方法 双酶切 pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经Not I 和EcoR I 双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性酶切、PCR和测序验证正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,采用Western blotting鉴定表达产物,亲和层析法纯化GST-NPTX2蛋白.结果 经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pGEX4T-1-NPTX2构建成功,表达产物相对分子量为70kD左右,与预期值相符,Western blotting证实该蛋白具有免疫反应特异性,亲和层析法获得了纯化的GST-NPTX2蛋白.结论 构建了pGEX-4T-NPTX2原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了GST-NPTX2融合蛋白.亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究NPTX2的生物学功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 神经元正五聚蛋白2 原核表达 克隆 分子 |
Construction of prokaryotic expression vector of human neuronal pentraxin 2 gene, and expression and purification of its recombinant protein |
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| ZHANG Ling,GAO Jun,LI Zhao-shen,DU Yi-qi,GONG Yan-fang,HUANG Wen,JIN Jing,WU Hong-yu,MAN Xiao-hua. Construction of prokaryotic expression vector of human neuronal pentraxin 2 gene, and expression and purification of its recombinant protein[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2009, 34(1) |
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| Authors: | ZHANG Ling GAO Jun LI Zhao-shen DU Yi-qi GONG Yan-fang HUANG Wen JIN Jing WU Hong-yu MAN Xiao-hua |
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