鸦胆子素D对HPV16感染细胞株的作用及其可能机制

目的:研究鸦胆子素D对高危型人类乳头瘤病毒(HPV)16感染细胞的增殖抑制作用、促凋亡作用及其可能机制。方法:以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株(Ect1/E6E7)作为HPV16型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型,用1、5、10、15、30μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定细胞增殖活性改变;以1、5、10μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h后,Cell cycle staining solution检测细胞生长周期变化,Hoechst33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡情况,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率。宫颈癌细胞株Caski含有完整的HPV16型E6、E7基因序列,以此作为阳性对照,通过实时荧光定量PCR技术检测两种细胞内HPV16 E6、E7基因m RNA的表达。结果:鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞具有明显的抑制体外增殖作用,MTT结果显示抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。经1、5、10μmol/L鸦胆子素D体外作用48 h后,细胞生长周期停滞于G1期。流式细胞仪检测显示,各实验组细胞经鸦胆子素D作用48 h后,细胞凋亡率分别为(6.25±0.76)%、(20.21±1.32)%和(8.61±1.59)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Hochest33258细胞核染色法显示细胞出现凋亡形态学改变。Real-time PCR技术检测结果显示Ect1/E6E7中HPV16 E6、E7m RNA表达水平无明显下降,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。而Caski中HPV16 E6、E7 m RNA表达水平下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鸦胆子素D能有效地抑制Ect1/E6E7细胞增殖,其机制可能是通过抑制HPV16 E6、E7 m RNA表达从而促进细胞凋亡。

The effect of Bruceine D on high-risk human papillomavirus 16 infected cell and its possible mechanism