结核分支杆菌38KD蛋白基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的构建和克隆结核分枝杆菌38kD蛋白的基因，以转基因技术导入大肠杆菌，诱导表达，以获得大量38kD抗原。方法根据GenBank上编码38kD蛋白的基因系列，设计一对特异引物，通过PCR技术从结核分支杆菌H37Rv基因扩增出38kD蛋白基因片段；目的基因连接到克隆载体pMD 18-T Simple Vector，测序鉴定，目的片段双酶切下来克隆到原核表达载体pET-30a中，成功构建成带有N末6His-tag的融合表达载体。表达载体用化学转化法转化E．coli BL21（DE3），用菌落PCR筛选得到阳性克隆；经1mmol／L IPTG诱导4h表达外源蛋白；而且在37℃时蛋白表达量最高；二烷基磺酸钠一聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析结果。结果38kD序列与GenBank报道完全一致；用菌落PCR筛选得到阳性克隆；经1mmol／L IPTG诱导4h表达外源蛋白；而且在37℃时蛋白表达量最高；二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析结果显示，在大约38kD处有表达产物特异条带；可溶性分析表明，该重组蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在；纯化的包涵体纯度达到90％。结论获得38kD蛋白工程菌株，为将此抗原用于临床诊断应用打下基础。

Cloning of the gene coding for 38kd protein of Mycobacterium tuberculosis and its expression in E. coli