大鼠miR-142-3p、 miR-145-3p表达模式分析

摘要： 目的 筛选并鉴定对大鼠乳腺发育和泌乳调控起关键作用的微 RNAs （miRNAs）。方法 以 U6 为内参基因, 运用实时荧光定量 PCR, 比较 miR-142-3p、 miR-145-3p 在泌乳 21 d 大鼠乳腺、 肝、 心、 脾、 肺、 肾、 卵巢、 子宫各器官的组织样品表达量的差异及不同泌乳阶段 （1、 7、 21 d） 乳腺组织 miR-142-3p、 miR-145-3p 的表达规律。结果 miR-142-3p 在泌乳 21 d 各组织的表达存在差异, 乳腺中的表达量显著高于心、 脾、 肺、 肾、 卵巢和子宫, 仅次于肝中的表达量 （P < 0.05）。miR-145-3p 在乳腺中的表达量显著高于肝、 脾和肾, 而在心、 肺、 卵巢和子宫中差异无统计学意义 （P > 0.05）。乳腺组织在泌乳 1、 7、 21 d 比较, miR-142-3p 的相对表达量持续下调, 而 miR-145-3p 的相对表达量先下调后上调。结论 miR-142-3p 和 miR-145-3p 在大鼠各组织及不同生理时期存在表达差异; miR-142-3p 可通过调节靶基因催乳素受体 （Prlr） 来调控乳腺的发育和泌乳的形成, miR-145-3p 可能具有与 miR-145、 miR-145-5p 相似的功能。     

人BRIT1基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义分析

目的检测宫颈癌组织和配对的宫颈非癌组织中的BRIT1表达情况,比较两者之间的表达差异。方法分别应用实时荧光PCR(RT-PCR)、免疫组化技术检测宫颈癌组织及其配对的宫颈非癌组织中BRIT1 mRNA和蛋白的表达水平,分析BRIT1蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤类型、肿瘤的病理分级和临床分期之间的关系。结果 RT-PCR结果揭示宫颈癌组织中BRIT1mRNA的表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P0.05);免疫组化技术结果揭示63例标本中的44例(69.8%)宫颈癌组织BRIT1蛋白表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P0.05);在高级的病理分级和临床分期中,BRIT1蛋白的表达减少更为明显。结论 BRIT1在宫颈癌癌组织和非癌组织中的表达差异提示BRIT1可能在宫颈癌的发生、发展中具有一定的作用。     

非小细胞肺癌中miRNA-141的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-141在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用real time-PCR法对54例非小细胞患者,肺癌组织及正常肺组织的miRNA-141表达水平进行定量分析,结果由2-△△CT处理,并分析与临床病理资料的关系。结果:在NSCLC患者肿瘤组织中miRNA-141表达水平明显升高,其表达与临床分期、病理类型显著相关(P<0.05)。而在不同年龄、性别、肿瘤大小、吸烟史患者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MiRNA-141高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型密切相关,miRNA-141有可能作为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。     

结直肠癌患者血浆中的miR-106a表达及其与预后的关系

目的:探讨血浆miR-106a水平与结直肠癌(CRC)患者预后生存的相关性。方法:收集60例健康体检志愿者(对照组),103例就诊我院的CRC患者(病例组),对所有人均进行血浆miR-106a实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测,同时采用Kaplan-Meier进行生存分析。结果:①血浆miR-106a在CRC组较对照组表达明显升高(P=0.004),与是否发生淋巴结转移有关(P=0.033);且患者术后miR-106a明显降低(P<0.001)。②对入院时CRC患者根据miR-106a相对值进行分组,miR-106a高值组术后3年内癌复发率高于低值组(P<0.001);K-M分析则显示高值组术后3年生存率低于低值组(P=0.003)。结论:血浆miR-106a的测定有助于CRC的诊断,且与CRC的复发转移有一定关系。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）蛋白的表达与子宫内膜癌生物学行为之间的关系。方法:选取中国医科大学附属盛京医院2013年5月-2014年5月手术切除的40例子宫内膜癌组织（均为腺癌）及30例正常子宫内膜组织。采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其Nampt mRNA的表达、免疫组织化学SP法及蛋白免疫印迹检测Nampt蛋白的表达水平,并分析其表达量与子宫内膜癌临床病理学参数的关系。结果:Nampt mRNA在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的相对表达量分别为3.774±2.399和1.286±0.762,差异有统计学意义（P＜0.05）。Nampt蛋白在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的相对表达量分别为0.426±0.16和0.203±0.129,差异有统计学意义（P＜0.05）。在不同临床分期、不同肌层浸润的子宫内膜癌组织中Nampt蛋白的表达量有统计学差异（P＜0.05）。结论:Nampt蛋白的过度表达在子宫内膜癌的发生、发展过程中可能起到一定的作用。     

非小细胞肺癌中miR-19a和miR-19b的表达及临床意义

目的:分析miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:非小细胞肺癌手术标本61例及其癌旁正常组织,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌及其癌旁正常组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果:miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌组织中的表达高于对应的癌旁正常肺组织,其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移相关（P<0.05）。而在不同年龄、性别和吸烟史患者间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:miR-19a、miR-19b高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型及有无淋巴结转移密切相关,miR-19a、miR-19b有可能成为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。     

低温保存脂肪间充质干细胞的生物学特性评价

目的 探讨低温保存对小鼠脂肪间充质干细胞（ADMSCs)体外培养的生物学特性和分化潜能的影响。方法 分离、培养小鼠ADMSCs,取第3代细胞置于液氮深低温（-196℃）冻存 12个月后复苏。MTT 法测定ADMSCs的增殖活性;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老;免疫细胞化学方法检测细胞表面分子CD73、CD90和CD105;条件培养基诱导后,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白（cTnT）,茜素红、碱性磷酸酶和油红 O 染色检测成骨、成脂诱导分化潜能,Real time-PCR检测cTnT、Gata4、Ost和Runx2。未经低温保存的第3代ADMSCs为对照。 结果 低温保存的ADMSCs其增殖活性、衰老率与未冻存细胞比较差异无显著性（P>0.05）。诱导后ADMSCs的cTnT阳性表达、茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色呈阳性反应,冻存组与对照组比较差异无显著性(P>0.05）。结论 低温保存对ADMSCs体外生长特性和成心肌、成脂肪细胞、成骨细胞的分化潜能差异无显著性。     

Evaluation of Gene Expression Changes of Serotonin Receptors, 5-HT3AR and 5-HT2AR as Main Stress Factors in Breast Cancer Patients

Breast cancer is a serious and potentially lethal multi-factor disease among 40-50 aged women in bothdeveloped and developing countries. Also, various studies have pointed to roles of neurotransmitters like serotoninin development of cancers, through action on various types of receptors. This study was conducted to evaluateserotonin receptor (5HT2AR and 5HT3AR) genes expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)of breast cancer patients in comparison with the healthy people and in the MCF7 cell line. Peripheral bloodsamples were obtained from 30 patients and 30 healthy individuals. Total RNA was extracted from PBMCs andMCF-7 cells. and 5HT2AR and 5HT3AR were detected by RT-PCR techniques. Finally, serotonin receptor geneexpression variation in breast cancer patients and MCF-7 cells were determined by real time-PCR. This latterindicated significant promotion in expression of 5HT3AR and 5HT2AR in PBMCs in breast cancer patientsbut expression of 5HT2AR in the MCF-7 cell line was significantly decreased. In conclusion, after performingcomplimentary tests, determine of gene expression changes in serotonin receptors (5HT2AR and 5HT3AR) maybe useful as a new approach in treatment of breast cancer based on use of antagonists.     

Wnt5a在慢性根尖周炎病损中的表达及临床意义

目的检测慢性根尖周炎根尖病损区Wnt5a的水平与细胞定位,探讨Wnt5a与炎症细胞浸润程度的关系,以及Wnt5a在慢性根尖周炎发展中的作用及意义。方法选取10例慢性根尖周炎牙作为实验组,根据根尖区组织的H-E染色,依炎症细胞浸润程度将病例组分为轻中度组、重度组。5例因正畸需要而拔除的健康牙作为对照组。采用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测样本Wnt5a的表达;免疫组织化学法检测样本中Wnt5a蛋白的表达,应用图像分析软件检测Wnt5a蛋白表达水平,分析Wnt5a表达高低与炎症程度的关系。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果Wnt5a在实验组与对照组均有表达,实验组中Wnt5a mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,重度炎症组Wnt5a的表达水平显著高于对照组(P<0.01);轻中度组Wnt5a的表达水平显著高于对照组(P<0.05);重度炎症组中Wnt5a的表达水平显著高于轻中度炎症组(P<0.05)。结论Wnt5a与慢性根尖周炎的炎症程度相关,可能参与了病变的始动过程,推测Wnt5a在慢性根尖周炎的发生、发展中起着一定作用。