What the structure of angiostatin may tell us about its mechanism of action

Summary.  Originally discovered in 1994 by Folkman and coworkers, angiostatin was identified through its antitumor effects in mice and later shown to be a potent inhibitor of angiogenesis. An internal fragment of plasminogen, angiostatin consists of kringle domains that are known to be lysine-binding. The crystal structure of angiostatin was the first multikringle domain-containing structure to be published. This review will focus on what is known about the structure of angiostatin and its implications in function from the current literature.     

中国人血管抑素基因的克隆及其序列分析

目的：克隆中国人血管抑素(angiostatin，ANG)基因全长并进行序列分析。方法：应用RT-PCR，将5例健康人肝脏组织ANG基因克隆到pSP71载体上，用Sanger法进行基因测序分析。结果：通过RT-PCR获得一个1141bp的扩增产物，测序发现与已报道的ANG比较，国人ANG上有3个碱基突变位点：分别为第825位C→T；第927位T→G和第1078位G→A。前两个碱基突变氨基酸未发生变化，第3个碱基突变结果使缬氨酸(Val342)改变成为蛋氨酸(Met342)。结论：克隆得到中国人ANG基因片段，其碱基和氨基酸的变化可能是人群中该基因的遗传多态现象。     

Kringle 5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建

目的：构建含有目的基因kring5的真核植物细胞穿酸表达载体。方法：应用RT－PCR方法，从正常人肝脏组织中获得kringle5基因，测序后，再通过DNA重组技术，将kringle5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI121和pCAMBIA3301上。结果：得到的kringle5基因序列测定结果与文献相符，重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确，含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论：重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制，而且可以在植物细胞中表达。     

血管抑素抑制兔眼表碱烧伤角膜缘移植术后的角膜血管新生

目的:检测眼表碱烧伤角膜缘移植术后血管抑素抑制角膜新生血管的作用。方法:16只新西兰大白兔双眼制作碱烧伤模型1d后,双眼行角膜缘移植术,术后左眼局部应用血管抑素治疗2周,右眼作对照;观测4周,根据新生血管侵入角膜缘内的范围、角膜混浊与水肿程度进行分级并作统计学处理;同时测量术后7、14、21及28d的眼压。结果:术后4周时,应用血管抑素的左眼的新生血管的评分为1.19±0.10,而对照组为1.63±0.72,统计学处理显示左眼的新生血管较右眼的明显减少(P<0.05),角膜混浊与水肿程度亦明显下降。各时间点各术眼的眼压均在正常范围,无统计学差异。结论:局部应用血管抑素能有效抑制眼表碱烧伤角膜缘移植术后的新生血管增生。     

妇科肿瘤患者尿液中血管抑素水平及临床意义

[目的]探讨测定尿液中血管抑素在妇科肿瘤诊断方面的价值.[方法]赖氨酸-ELISA法测定25例健康妇女、31例妇科良性肿瘤患者及32例妇科恶性肿瘤患者尿液中血管抑素水平.[结果]妇科恶性肿瘤组尿血管抑素水平及阳性率(中位水平为2.06,阳性率78%)高于正常组及良性肿瘤组(中位水平分别为0.70及0.80,阳性率分别为32%及35%),差异有显著性(P＜0.05及P＜0.01);正常组与良性肿瘤组尿血管抑素水平差异无显著性(P＞0.05).[结论]赖氨酸-ELISA法测定尿液中血管抑素水平可能成为一项协助妇科恶性肿瘤临床诊断的指标.     

血管抑素3A工程蛋白的柱复性与离子交换纯化

由大肠杆菌以包涵体形式表达的一种抗内皮细胞生长工程蛋白(A nti-ang iogen ic agent,简称3A)经变性,Sephacry l S-100 HR柱复性,SP Sepharose FF离子交换吸附纯化,SephadexG-25脱盐,获得复性率为53.47%,HPLC纯度为92.52%的3A活性蛋白。以猪髋动脉内皮细胞为受检细胞,表明纯化蛋白具有抑制内皮细胞生长的特性。     

Angiostatin基因转染对膀胱癌BIU-87细胞系生物学行为的影响

目的 探讨外源性血管抑素(angiostatin)基因在人膀胱癌BIU-87细胞中的表达及其意义。方法 将人全长angiostatin基因经脂质体包裹转染膀胱癌BIU-87细胞,行G418筛选获得转基因瘤细胞克隆,比较转基因和未转基因的瘤细胞生长特性。采用免疫荧光、免疫组化及Western blot等方法检测瘤细胞angiostatin蛋白的表达,并应用鸡胚尿囊膜血管生成实验及脐静脉内皮细胞增殖实验检测其活性。结果 外源性angiostatin基因的表达对BIU-87瘤细胞的生长并无影响。转染细胞在体外明显抑制脐静脉内皮细胞的增殖并对鸡胚尿囊膜的血管生成具有明显的抑制作用。结论Angiostatin能特异性地抑制血管内皮细胞增殖,进而抑制血管生成。     

非小细胞肺癌组织中angiostatin与VEGF mRNA的转录表达及临床病理意义

目的探讨血管抑素(AS)与血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)发展过程中的作用及意义。方法采用RT-PCR方法检测48例NSCLC癌组织及癌旁肺组织中AS和VEGF mRNA的转录表达,探讨其表达水平与NSCLC临床病理特征的关系。结果AS和VEGF mRNA在肺癌组织中的表达均高于癌旁肺组织(P<0.05)。AS mRNA的表达与NSCLC的淋巴结转移及临床分期呈负相关(P<0.05)。VEGF mRNA的表达与NSCLC淋巴结转移及临床分期呈正相关(P<0.01),与组织分化程度呈负相关(P<0.05)。AS与VEGF间的表达无相关性(P>0.05)。结论NSCLC中AS和VEGF mRNA转录水平的增高,可以反映肺癌的恶性程度及癌细胞的侵袭转移能力,与NSCLC的发生及进展过程相关。     

红景天与绛香对心肌梗死大鼠血管抑素和内皮抑素表达的影响

目的观察红景天、绛香对缺血心肌中内皮抑素和血管抑素表达的影响,探讨红景天、绛香促血管生成作用的机制.方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,按标准方法结扎左冠状动脉前降支,随机分为假手术组和心肌梗死组,心肌梗死组再随机分为对照组、红景天组和绛香组;假手术组和对照组于造模后每天给予生理盐水灌胃;红景天组和绛香组分别于造模后给予红景天、绛香水煎剂灌胃.采用Westernblott法检测心肌组织的血管抑素水平.采用双抗体夹心ELISA法,测定心肌内皮抑素浓度.结果假手术组和对照组比较,绛香组与红景天组缺血心肌内血管数目明显增加(P＜0.05),两组比较无统计学意义(P＞0.05);红景天组和绛香组大鼠梗死边缘区缺血心肌内血管抑素的表达较对照组轻度减少,高于假手术组,红景天组和绛香组之间内皮抑素表达差异不明显.红景天组和绛香组内皮抑素的表达量高于假手术组(P＜0.05),两组比较无统计学意义(P＞0.05).结论红景天、绛香能够明显增加梗死边缘区心肌内血管密度,同时轻度降低血管抑素和内皮抑素的表达,提示红景天和绛香在一定程度上改变了缺血心肌中血管新生的平衡,使血管生长的各因子的平衡向促进血管新生的方向发展.     

Pancreatic tumor growth is regulated by the balance between positive and negative modulators of angiogenesis

There is increasing evidence for the implication of tumor-derived angiogenic and anti-angiogenic factors in controlling tumor growth in vivo. In this study, we documented the production of inhibitors of angiogenesis by pancreatic cancer cells and examined how changes in the balance between pro- and anti-angiogenic factors regulate tumor growth in vivo. The human pancreatic cancer cell line Hs-776T (HS-W) produces slow-growing tumors in SCID mice. Cells of a variant form (HS-R) of Hs-776T produced faster-growing tumors compared to HS-W. Characterization of HS-W and HS-R cells in vitro showed similar proliferation rates and production of the angiogenic factors vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF). Analyzes of anti-angiogenic factors showed comparable levels of angiostatin and thrombospondin 1 and 2, but endostatin was only detected in conditioned media of HS-W cells and was absent in HS-R. Cell proliferation was similar in both tumor types in vivo, whereas HS-W tumors demonstrated increased apoptosis with a high percentage of apoptotic endothelial cells (EC). Subsequently, VEGF was over-expressed in Hs-776T cells (HS-VF), resulting in rapidly growing tumors and lowering tumor and EC apoptosis. Collectively, our study confirms that tumor growth is dependent on its ability to increase the angiogenic stimulus or to reduce the amounts of endogenous anti-angiogenic factors.