NRAGE影响人食管癌细胞放射抗性的作用及其机制研究

背景与目的：食管癌是全球威胁人类生命和健康的常见恶性肿瘤之一，中国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抗性是导致其治疗失败的主要原因。神经营养因子受体相互作用MAGE类药物（neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog，NRAGE）在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与食管癌细胞放射抗性的形成。通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，以进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，分析该基因影响放射抗性的具体机制。方法：通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系。采用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitive polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中β-catenin表达情况。组间差异采用t检验或方差分析。结果：实验分为转染过表达组（Eca109/NRAGE组）和空白对照组（Eca109组）。Eca109/NRAGE细胞中NRAGE的表达量明显高于Eca109（t=29.65，P<0.05）。照射后Eca109/NRAGE细胞的放射抗性显著高于Eca109。流式细胞术检测结果显示，Eca109/NRAGE细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，对射线最敏感的G ₂ /M期减少。Eca109/NRAGE细胞凋亡率较Eca109细胞降低（t=3.268，P<0.05）。Eca109/NRAGE细胞迁移和侵袭能力均高于Eca109。RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，β-catenin的mRNA表达及蛋白水平在Eca109/NRAGE细胞中明显高于Eca109（t=15.87，P<0.05）。结论：NRAGE参与Eca109细胞放射抗性的形成，改变细胞的细胞周期分布和凋亡情况，影响细胞迁移及侵袭能力并可能影响食管癌细胞的放射敏感性，该作用可能与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

miR-183 promotes radioresistance of lung adenocarcinoma H1299 cells via epithelial-mesenchymal transition

Lung adenocarcinomas are usually sensitive to radiation therapy, but some develop resistance. Radiation resistance can lead to poor patient prognosis. Studies have shown that lung adenocarcinoma cells (H1299 cells) can develop radioresistance through epithelial-mesenchymal transition (EMT), and this process is regulated by miRNAs. However, it is unclear which miRNAs are involved in the process of EMT. In our present study, we found that miR-183 expression was increased in a radioresistant lung adenocarcinoma cell line (H1299R cells). We then explored the regulatory mechanism of miR-183 and found that it may be involved in the regulation of zinc finger E-box-binding homeobox 1 (ZEB1) expression and mediate EMT in lung adenocarcinoma cells. qPCR results showed that miR-183, ZEB1, and vimentin were highly expressed in H1299R cells, whereas no difference was observed in E-cadherin expression. Western blot results showed that ZEB1 and vimentin were highly expressed in H1299R cells, while E-cadherin expression was decreased. When miR-183 expression was inhibited in H1299R cells, radiation resistance, proliferation, and cell migration were decreased. The expression of ZEB1 and vimentin in H1299R cells was decreased, while the expression of E-cadherin was increased. Moreover, miR-183 overexpression in H1299 cells enhanced radiation resistance, proliferative capacity, and cell migration ability. The expression of ZEB1 and vimentin in H1299 cells was increased, while that of E-cadherin was decreased. In conclusion, miR-183 may promote EMT and radioresistance in H1299 cells, and targeting the miR-183-ZEB1 signaling pathway may be a promising approach for lung cancer treatment.     

miR-206 enhances nasopharyngeal carcinoma radiosensitivity by targeting IGF1

Radioresistance remains a major problem in nasopharyngeal carcinoma (NPC) treatment. However, the underlying molecular mechanisms of NPC radioresistance remain poorly understood. The present study aimed to investigate the potential role and mechanism of miR-206 in NPC radioresistance. We observed that miR-206 was down-regulated in radioresistant NPC cells. Furthermore, restoration of miR-206 in CNE2-IR cells suppressed enhanced radiosensitivity of NPC cells. In contrast, inhibition of miR-206 in CNE2 cells reduced the radiosensitivity. We also found that miR-206 directly targeted IGF1 and inhibited the PI3K/AKT pathway. Our data demonstrate that miR-206 sensitizes NPC cell to irradiation by targeting IGF1, highlighting the therapeutic potential of miR-206 in NPC radiosensitization.     

X线反复照射人肺癌细胞系Anip973后的生物特性变化

目的通过X线反复照射体外培养的肺腺癌细胞系Anip973，初步探寻其生物学特征的变化。方法应用高能X线反复照射肺腺癌Anip973细胞15次，4Gy/次，共60Gy。对亲代和子代细胞采用克隆形成实验测定其放射敏感性。根据生长曲线计算Anip973R细胞及其亲代细胞倍增时间，用流式细胞术检测细胞周期分布特征。结果与亲代相比Anip973R细胞D0、Dq、SF2均增大，d值减小，分别为1．61、1．29、0．532、0．312，而Anip973细胞分别为1．53、0．42、0．339、0．3524。Anip973R细胞放射耐受性增高，其细胞倍增时间较亲代细胞延长3h。细胞周期显示G1、S期比例分别增高、减少（P〈0．05），G2＋M期比例相似（P〉0．05）。结论Anip973细胞经X线反复照射后与亲代细胞相比放射耐受性增高、细胞倍增时间延长。     

鼻咽癌细胞辐射抗拒的比较蛋白质组学分析

目的 通过分离并鉴定具有不同辐射抗拒的人鼻咽癌细胞株CNE-2R与CNE-2的差异表达蛋白,探讨与鼻咽癌细胞辐射抗拒相关的分子机制.方法 分别提取鼻咽癌辐射抗拒细胞株CNE-2R及其亲本细胞株CNE-2的总蛋白,采用双向凝胶电泳分离,经软件分析识别差异表达蛋白点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质.结果 两种不同辐射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE-2R和CNE-2中,共筛选出差异表达明显的蛋白质点有32个,其中11个蛋白质被鉴定成功,在CNE-2R中上调的蛋白有3个,下调的蛋白有8个.结论 不同辐射敏感性的鼻咽癌细胞的差异表达蛋白,主要涉及调节凋亡、DNA损伤与修复、细胞周期调控、RNA转录、细胞信号转导、细胞骨架组成及辐射应激反应等多个方面.     

Wnt信号通路在食管癌细胞放射抗拒性形成中的作用

目的:研究Wnt信号通路在食管癌细胞放射抗拒性形成中的作用。方法:采用real-time RT-PCR检测Wnt通路mRNA的表达;Western blotting和免疫荧光检测Wnt通路蛋白的表达;动物成瘤实验比较细胞在体内的增殖和成瘤能力。结果:Wnt1表达上调引起Wnt通路激活,继而引起下游一系列的基因表达改变;β-连环蛋白(β-catenin)在细胞内蓄积,并向核内转移,调控的下游蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和WISP1表达量增多;放射抗拒性的食管癌细胞在小鼠体内表现出更强的增殖和成瘤能力。结论:Wnt信号通路引起的细胞增殖加速可能是食管癌细胞放射抗拒性形成的重要原因。     

miR-182通过HES1调控宫颈癌耐放疗细胞株的上皮间质转化

目的 探讨miR-182在宫颈癌耐放疗细胞株中的作用及其调控方式。方法 采用分割剂量照射法诱导宫颈癌耐放疗HeLa细胞株和SiHa细胞株,分别每周4 Gy 照射1次(HR4组和SR4组)和每周6 Gy照射1次(HR6组和SR6组)。采用RT-qPCR和Western blot检测4株耐放疗细胞中发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1,HES1) 和miR-182的表达。在筛选的耐放疗HR6细胞中下调miR-182后,检测该细胞中上皮间质转化相关因子E-cadherin、Slug mRNA和蛋白的表达, Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;并观察耐放疗HR6细胞中miR-182与HES1相互表达的影响。结果  与未照射宫颈癌HeLa和SiHa细胞比较,耐放疗 HeLa和SiHa细胞中HES1表达均显著降低(P<0.05),miR-182表达显著升高(P<0.05),且在不同耐放疗细胞株中miR-182表达有差异性(P<0.05)。下调miR-182后,HR6细胞中E-cadherin 表达增强,Slug表达降低,且细胞迁移、侵袭能力减弱。HR6细胞中miR-182下调后HES1表达升高,但下调HES1 后miR-182表达无明显变化。结论 宫颈癌耐放疗细胞中下调miR-182可上调HES1,从而逆转上皮间质转化并抑制细胞迁移、侵袭,HES1可能是miR-182发挥作用的靶点。     

CD44+/CD24+宫颈癌细胞和耐辐射宫颈癌细胞特性研究

目的 探讨放疗抵抗的宫颈癌细胞特性,揭示宫颈癌复发和转移的机制。方法 用多次分割照射获得耐辐射的宫颈鳞状细胞癌Siha细胞,利用流式细胞仪从宫颈鳞癌的亲代细胞中分选获得CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞。将耐辐射的宫颈鳞癌细胞和CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞设为实验组,亲代宫颈鳞癌细胞设为对照组,分别进行克隆形成实验和肿瘤移植瘤实验,评估实验组细胞是否具备肿瘤干细胞特性。通过Transwell侵袭实验研究实验组及对照组细胞侵袭和转移能力的差异。利用RT-PCR和Western blot检测实验组及对照组细胞OCT-4、Survivin、ABCG2和bcl-2 mRNA的表达,以及与肿瘤转移相关的E-cadherin和vimentin蛋白表达。结果 辐射抵抗的宫颈鳞癌细胞和CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞较亲代宫颈癌细胞高表达抗凋亡蛋白Bcl-2（t=205.26、198.17,P<0.05）和凋亡抑制蛋白survivin（t=896.62、765.34,P<0.05）,并表达肿瘤干细胞相关标志物OCT-4和ABCG2（t=92.13、81.26、220.45、216.32,P<0.05）。两组细胞均具有较强的致瘤能力以及侵袭和转移能力,且表现出E-cadherin下调和vimentin蛋白上调的EMT相关的分子表型变化。结论 放射抵抗的宫颈鳞癌细胞与CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞表现出相同的肿瘤干细胞特性,经历了上皮间质转化过程,放射可以富集宫颈癌干细胞。     

鼻咽癌放射抗拒相关microRNAs研究进展

鼻咽癌是一种起源于鼻咽部上皮组织的鳞状细胞恶性肿瘤,在东南亚和中国华南地区具有很高的发病率,目前放疗已成为鼻咽癌的首选治疗方式。放射抗拒是鼻咽癌放疗成功的主要障碍,寻找鼻咽癌放射抗拒相关的生物标志物,明确放射抗拒的产生机制,对治疗具有重大意义。MicroRNAs通过结合靶mRNA的3’UTR 从而诱导其翻译抑制或降解,调节蛋白的表达,参与放疗反应相关的所有重要的细胞过程如DNA损伤反应与修复、细胞凋亡、增殖以及血管生成的调节。近年来鼻咽癌放射抗拒相关microRNAs的研究成为热点,本文就microRNAs及其潜在的作用机制进行综述。