Notch1和NUMB在胃癌组织中的表达水平及其意义

目的 研究Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系.方法 采用Real-time PCR和Western blotting检测胃癌肿瘤组织和相应正常组织内Notch1和NUMB的表达.结果 Notchl mRNA在胃癌中的平均表达水平是正常胃组织的1.67倍(P<0.05),且与肿瘤的分...     

肝细胞癌中Notch1和Notch3的表达及其临床意义

目的 探讨Notch1和Notch3在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 收集本院2012年12月至2013年5月42例HCC组织及对应癌旁组织的石蜡标本,采用免疫组化法检测不同组织中Notch1及Notch3的表达情况,并分析癌组织中Notch1和Notch3的表达与临床病理特征的关系。结果 Notch1的总体阳性表达率为57.1％,其在细胞核、胞浆、胞膜中的阳性表达率依次为38.1％、23.8％和2.4％,仅胞核的阳性表达率高于癌旁组织（16.7%,P＜0.05）。Notch3的总体阳性表达率为16.7％,其在细胞核、胞浆、胞膜的阳性表达率依次为11.9％、4.8％和0,与癌旁组织比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。HCC组织中Notch1表达与肿瘤分化程度有关,Notch3表达与HCC临床病理特征无关。结论 Notch1和Notch3在HCC组织中存在强弱不等的表达,主要表达于细胞浆和胞核,Notch1可能与HCC的发生、发展有关。     

Notch信号对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的　探讨Ｎｏｔｃｈ１信号对高糖情况下多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-１［Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ-ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓ-１,ＰＡＲＰ-１］和核因子-κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ,ＮＦ-κＢ）的ｐ５０亚单位（ＮＦ-κＢ５０）介导的人视网膜血管内皮细胞（ｒｅｔｉｎａｌｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＲＶＥＣｓ）凋亡的抑制作用。方法　体外培养人ＲＶＥＣｓ及ＨＥＫ２９３Ｔ细胞,并进行传代,同时构建高糖（葡萄糖浓度为３０ｍｍｏｌ?Ｌ－１）人ＲＶＥＣｓ细胞模型。构建ｐＣＭＶ-Ｓｃｒｉｐｔ-Ｎｏｔｃｈ１和ｐＣＭＶ-Ｓｃｒｉｐｔ-ＤＬＬ４质粒,酶切鉴定后ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测重组质粒表达目的基因的效果,同时合成ｓｉＮｏｔｃｈ１并转染高糖培养的人ＲＶＥＣｓ,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测Ｎｏｔｃｈ基因敲除效果。应用免疫共沉淀及ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测ｓｉＮｏｔｃｈ１对高糖下ＰＡＲＰ-１和ＮＦ-κＢ的相互作用的影响;应用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测高糖条件下Ｎｏｔｃｈ１／ＤＬＬ４上调和下调后人ＲＶＥＣｓ中ＰＡＲＰ-１、ｐ-ＡＫＴ、ＮＦ-κＢ５０及ｃａｓｐａｓｅ-３的表达变化。结果　人ＲＶＥＣｓ复苏后２４ｈ贴壁,细胞呈扁平梭形,３ｄ左右细胞开始融合呈铺路石样,单层生长,铺满瓶底,并可见接触抑制现象。免疫共沉淀结果显示高糖组培养的人ＲＶＥＣｓ其ＰＡＲＰ-１结合的ＮＦ-κＢ５０的量较正常对照组增加;将ｓｉＮｏｔｃｈ１转染高糖组培养的人ＲＶＥＣｓ后或同时加入ＤＬＬ４,则人ＲＶＥＣｓ中ＰＡＲＰ-１结合的ＮＦ-κＢ５０的量较前增加显著,提示Ｎｏｔｃｈ能抑制高糖下ＰＡＲＰ-１和ＮＦ-κＢ５０的相互作用。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测结果显示高糖条件下,Ｎｏｔｃｈ１和ＤＬＬ４上调后其ＰＡＲＰ-１及ｃａｓｐａｓｅ-３表达量较前显著降低;Ｎｏｔｃｈ１下调后其ＰＡＲＰ-１及ｃａｓｐａｓｅ-３表达量较前增加;ｐ-ＡＫＴ表达量则相反;提示Ｎｏｔｃｈ信号能抑制高糖诱导的ＰＡＲＰ-１及ｃａｓｐａｓｅ-３的激活及表达。结论　高糖情况下Ｎｏｔｃｈ信号可调控ＰＡＲＰ-１和ＮＦ-κＢ的相互作用,并抑制ＰＡＲＰ-１激活引起的人ＲＶＥＣｓ的凋亡。     

Notch1信号蛋白在卵巢癌中的表达及临床意义

目的：检测Notch1在卵巢上皮性肿瘤的表达,探讨其在卵巢癌的形成和转化过程中的表达特点及其与卵巢癌临床病理学参数的关系。方法：采用免疫组化法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及Western blot法检测109例卵巢癌（其中65例为单侧卵巢癌）、65例单侧卵巢癌患者健侧卵巢（配对对照）及48例正常卵巢组织（正常对照）中Notch1的表达。结果：（1）卵巢癌中Notch1阳性表达率[95.4%（104/109）]显著高于配对对照组[7.7%（5/65）]和正常对照组[6.3%（3/48）]（P〈0.01）,而后两组则无显著差异（P〉0.05）。（2）卵巢癌中Notch1的表达与临床分期（FIGO）及病理分化程度有关（P〈0.01）,临床分期越高、分化程度越低,Notch1的表达越高;而与年龄、家族史、肿瘤位置、有无腹水、有无周围组织浸润、有无淋巴结转移、病理类型无关（P〉0.05）。结论：Notch1在卵巢癌的发生发展过程中起着促癌基因作用,为卵巢癌的深入研究提供了一条新思路。     

β淀粉样肽对神经母细胞瘤细胞Notch信号通路的影响

目的：研究β淀粉样肽（Aβ）处理SH-SY5Y细胞以及α3神经型尼古丁受体（α3nAChR）沉默细胞后细胞Notch信号通路的变化.方法：2μmol/L Aβ处理SH-SY5Y细胞以及α3nAChR沉默细胞,用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time PCR）和蛋白印迹（western blot）方法分别检测细胞中Notch信号通路中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平的变化,评价Aβ对细胞Notch信号通路的影响.结果：Aβ处理的SH-SY5Y细胞以及α3 nAChR沉默细胞中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平表达均增加,且在α3 nAChR沉默细胞中增加更为明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：Aβ可增加细胞Notch信号通路基因表达,αα3 nAChR沉默会增强Aβ对Notch信号通路基因表达的影响,这可能与阿尔茨海默氏病（AD）的发病有一定的关系.     

AIRE通过调控Notch1表达影响CD4~+CD25~+Treg的作用及其机制

目的：研究AIRE基因是否可通过调控Notch1的表达而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导及功能,探讨AIRE在外周免疫耐受中的作用机制。 方法：将RAW264.7细胞分为转染组和未转染组,采用脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转入RAW264.7细胞, 采用RT-PCR法检测各组AIRE mRNA的表达及Notch1 mRNA表达的变化。 将RAW264.7细胞分为转染组、转染并经Notch1抗体阻断组、 阴性对照组及未转染并经Notch1抗体阻断组,分别采用FACS法及RT-PCR法检测各组RAW264.7细胞对CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA 表达的影响。 结果： 质粒成功转入RAW264.7细胞内。 AIRE转染组较未转染组Notch1 mRNA表达增加。 AIRE转染组较未转染组CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能相关基因Foxp3 mRNA的表达水平均增加,经Notch1抗体阻断后, AIRE转染组与未转染组CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能均较对照组降低。 结论：AIRE可能通过上调RAW264.7细胞上Notch1的表达进而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导产生及功能,从而在维持外周免疫耐受方面发挥一定的作用。     

Small interfering RNA-mediated knockdown of Notchl in lung T cells of asthmatic mice affects T cell differentiation

Background The immunologic response to allergens mediated by T lymphocytes is an incipient key element in the pathogenesis of asthma,and Th1/Th2 balance is regarded as the core of asthma pathogenesis.Notch is a single-pass transmembrane receptor protein that regulates differentiation,proliferation and apoptosis in a broad range of cells.It is considered that the Notch signal pathway works in every stage of T cell development and differentiation.Whether the pathway of asthma pathogenesis is related to Notch1 remains unknown.This study is aimed to investigate whether the pathway of asthma pathogenesis is related to Notch1 by examining the effect of knockdown of the Notch1 gene by small interfering RNA on T cell differentiation.Methods An OVA-induced asthma mouse model was established.The expression of Notch1 in the tissue and T cells of the lung from asthmatic mice was detected by RT-PCR and Western blotting.The expression of Notch1 and cytokine interleukin(IL)-4 and interferon(IFN)-γ in activated lung T cells was detected by RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay after blocking Notch1 by small interfering RNA.Results The mRNA and protein expression of Notch1 increased significantly both in the lung tissue and lung T cells of asthmatic mice(both P＜0.05).IL-4 decreased and IFN-γ increased significantly in active lung T cells after Notch1 was blocked by Notch1-specific small interfering RNA(IL-4:(2.51±0.51)pg/ml vs 0.64±0.27)pg/ml protein;IFN-γ:(21.72±4.24)pg/ml vs(39.79±4.09)pg/ml protein,P＜0.05).Conclusion This study demonstrated that the Notch1 signal might play a role in the pathogenesis of asthma by its involvement in Th1/Th2 differentiation.     

再生障碍性贫血及慢性粒细胞性白血病患者骨髓单个核细胞Notchl表达研究

目的 了解再生障碍性贫血（AA）患者及慢性粒细胞性白血病（CML）患者骨髓单个核细胞（BMMNC）Notchl表达情况，探讨Notchl与骨髓增生能力的相关性。方法应用半定量RT-PCR检测15例AA患者、8名正常对照者和10例CML患者BMMNC的Notchl的表达，并比较了8例AA患者化疗前后BMMNC的Notchl的表达，及10例CML患者化疗前后BMMNC的Notchl的表达。结果AA患者BMMNC的Notchl表达低于正常对照组（P〈0．05）；CML患者BMMNC的Notchl表达高于正常对照组（P〈0．05）；AA患者化疗后Notchl表达上调（P〈0．05）；CML患者化疗后Notchl表达下调（P〈0．05）。结论Notchl在AA患者13MMNC和正常人BMMNC中表达有差异，可能是AA患者骨髓增生能力低下的原因之一；AA患者化疗后BMMNC的Notchl表达水平上调，提示皮质激素和睾丸酮联合应用提高AA患者造血能力可能与Notchl上调有关。CML患者BMMNC的Notchl表达高于正常人，化疗缓解后Notchl表达下调，提示Notchl过度表达可能与CML的发生相关。     

激活Notchl信号对宫颈癌细胞生长的影响及其机制

目的 研究Notch1（ICN）基因对人宫颈癌细胞生长的影响，并对其作用机制进行探讨。方法 采用脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞，MTT比色法测定瞬时表达Notch1（ICN）对细胞生长的影响，用流式细胞仪分析细胞周期分布的变化，Western blot法检测P53蛋白的表达改变。结果 瞬时表达Notch1（ICN）基因可以抑制HeLa细胞的生长，使细胞周期停滞在G1期，并上调细胞周期调控蛋白P53的表达水平。结论 通过影响细胞周期的分布及细胞周期调控蛋白的表达，激活Notch1基因可抑制人宫颈癌细胞的生长。     

支气管哮喘BALB/c小鼠肺组织及肺T细胞中Notchl的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及其T细胞中Notch1基因的表达,探讨其与支气管哮喘发病的关系。方法卵清蛋白腹腔注射及雾化吸入建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型(n=10)。于建模后24 h麻醉下放血处死动物,右肺组织分离T细胞并进行纯度鉴定,运用免疫组化染色观察左肺组织Notch1蛋白表达;半定量RT-PCR法检测左肺组织和右肺分离获得T细胞中Notch1 mRNA的表达。以腹腔注射和雾化吸入生理盐水的BALB/c小鼠作为对照(n=10)。结果免疫组化染色发现,哮喘模型组小鼠肺组织Notch1阳性染色程度明显强于对照组。半定量RT-PCR分析显示,哮喘模型组和对照组小鼠Notch1mRNA表达在肺组织分别为0.83±0.60和0.33±0.31,在肺T细胞中分别为0.36±0.20和0.11±0.21;组间比较均有显著差异(P<0.05)。结论Notch1在支气管哮喘发病环节中表现为促进作用,为研究支气管哮喘的发病机制提供了新途径。