基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

鸡抗内毒素卵黄抗体IgY的制备

目的：研究分别应用内毒素（LPS）、类脂A(LipidA)和大肠杆菌突变株15免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量、纯度、效价并筛选最佳免疫抗原。方法：分别应用内毒素（LPS）、类脂A(LipidA)和大肠杆菌J5突变株作为抗原免疫25周龄Leghom鸡，水溶法（WD）提取蛋黄中抗体IgY，双紫外光测定抗体含量，SDS-PSGE电泳检测抗体纯度，细胞酶联染色和ELISA检测抗体特异性、效价及筛选最佳免疫抗原。结果：3种抗内毒素IgY含量和效价分别为14.4mg/ml和1：12 800（J5）、10.61mg/ml和1：12 800（LPS）、9.26mg/ml和1：3200（LipidA），抗体纯度均为95％左右。结论：大肠杆菌突变株J5和内毒素（LPS）为最佳免疫抗原，免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量和效价最高。     

异丙酚对脂多糖诱导的内皮细胞通透性的影响

目的 探讨异丙酚对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞通透性和过氧亚硝基阴离子的影响。方法 脐静脉内皮细胞随机分7组，每组5份，并施以不同的处理：⑴对照组；⑵LPS0.1组（脂多糖终浓度为0.1?g/mL）；⑶LPS1组（脂多糖终浓度为1?g/mL）；⑷LPS10组（脂多糖终浓度为10?g/mL）；⑸P4（丙泊酚终浓度为4?g/mL）+ LPS10组；⑹P40（丙泊酚终浓度为40?g/mL）+ LPS10组； ⑺I40（脂质溶剂的体积和浓度同P40组）+ LPS10组。孵育6h后测定内皮单层滤过系数（Kf）和蛋白质渗透压反射系数（s）以反映内皮细胞通透性的变化。用MTT法测定内皮细胞存活率、流式细胞技术检测硝基酪氨酸(nitrotyrosine, NT)的蛋白表达。结果 与C组比较，LPS呈浓度依赖性使内皮细胞Kf增加、s减少，NT蛋白表达显著增加，细胞存活率降低（P <0.01），且NT表达与细胞存活率之间呈负相关；P4+ LPS10及P40+ LPS10两组可显著减少LPS 引起内皮细胞Kf 和s 的变化，抑制NT蛋白的表达并提高细胞的存活率（P <0.01）。I4+ LPS10组无上述保护效应。结论 异丙酚可减少LPS所致单层内皮细胞通透性的增加，提高细胞存活率，这种保护作用可能与其抑制过氧亚硝基阴离子（ONOO-）的过量生成密切相关。     

虎杖甙对脂多糖刺激下中性粒细胞趋化反应的影响

OBJECTIVE: To understand the action mechanisms of polydatin (PD) in the treatment of septic shock in view of its effect on lipopolysaccharide (LPS)-induced chemotaxis of the leucocytes. METHOD: Chemotactic chamber assay was used to investigate the regulative role of PD in chemotaxis of the neutrophils in response to LPS stimulation. RESULTS: The chemotactic index of normal neutrophils was 4.96+/-0.69, which was significantly increased by LPS stimulation. LPS stimulation at the doses of 10, 100, and 1000 ng/ml resulted in the elevation of the chemotactic index of the neutrophils to 8.94+/-1.73, 10.31+/-1.180 and 7.12+/-1.46 respectively (P<0.05), an effect potently reversed by the application of PD at the concentrations ranging from 0.008 to 0.8 mg/ml, of which 0.08 mg/ml was the most effective concentration that produced a decrease of the chemotactic index to 1.95+/-0.17. In addition, PD exhibited obvious anti-LPS effect after treatment for 5 to 60 min (P<0.05), while showing no influence on the chemotaxis of normal neutrophils (P>0.05). CONCLUSION: PD can regulate neutrophil chemotaxis in inflammatory reactions and may play a crucial role in the treatment of infections and inflammation.     

氯胺酮对脂多糖诱导下人脐静脉内皮细胞活化的影响

目的 观察氯胺酮和N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK-801对脂多糖(LPS)刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达及核因子-kappa B(NF-kB)易位表达的影响。方法 采用Jaffe方法培养的HUVECs随机分为10组:对照组(C组,RPMI-1640),LPS组(L组,LPS1μg/ml),氯胺酮组(K组,依浓度不同分为KⅠ、KⅡ、KⅢ、KⅣ亚组,即氯胺酮12.5、25.0、100、300μmol/L LPS1μg/ml),MK-801组(M组,依浓度不同分为MⅠ、MⅡ、MⅢ、MⅣ亚组,即MK-801 1.25、2.50、10、30μmol/L LPS1μg/ml)。在37℃、5％CO_2中孵育18h后,用流式细胞仪检测ICAM-1的表达阳性率。NF-kB易位表达的测定分组处理同上,在LPS1μg/ml刺激2h后,用免疫组化(SP)方法测定内皮细胞中NF-kB p65亚基的表达。结果 KⅡ、KⅢ、KⅣ亚组可抑制LPS作用下HUVECs表面ICAM-1的表达和细胞内部NF-kB的易位表达(P<0.05),且两者的变化呈正相关(r=0.985,P<0.01)。M组各亚组对LPS作用后HUVECs表面ICAM-1的表达和NF-kB的易位表达无明显影响(P>0.05)。结论 氯胺酮对炎症反应中内皮细胞的活化具有抑制作用,但并非通过NMDA受体途径。     

脂多糖刺激树突状细胞前后TLR2、3、4基因表达的检测

目的 检测脂多糖作用于树突状细胞前后TLR2、3、4基因的表达情况。方法 从外周血分离单核细胞，加入rhGM-CSF及rhIL-4，培养的第6天，实验组加入脂多糖刺激24h，对照组不加。分别提取细胞总RNA，行半定量RT-PCR，产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果 单核细胞经GM-CSF及IL-4诱导7d后的DC表达较高水平TLR2、3、4。脂多糖刺激24h后，TLR2、3、4表达下降，TLR4几乎测不到。结论 树突状细胞在受脂多糖刺激前后TLRs的表达有显著变化，推测和它的功能成熟有关。     

纳络酮对脂多糖诱导原代培养星形胶质细胞释放谷氨酸的抑制效应

目的探讨纳络酮对脂多糖诱导原代培养星形胶质细胞释放谷氨酸的抑制效应。方法体外培养星形胶质细胞于融合状态,随机分为5组(1)对照组(L0 N0);(2)1μg·ml-1脂多糖组(L1 N0);(3)1μg·ml-1脂多糖 0.5μmol·L-1纳络酮组(L1 N0.5);(4)1μg·ml-1脂多糖 1.0μmol·L-1纳络酮组(L1 N1.0);(5)1μg·ml-1脂多糖 2.0μmol·L-1纳络酮组(L1 N2.0)。各组培养液均换成Neurobasal/B27无血清培养液后,在相应组中加入上述相应终浓度的脂多糖和纳络酮,继续培养2h。用反相高效液相色谱分析方法测定各组细胞外液中谷氨酸含量。结果L1 N0组中谷氨酸含量明显高于L0 N0组,其差异有极显著性意义(P<0.05);L1 N0.5、L1 N1.0、L1 N2.0组内谷氨酸的含量则随着纳络酮用量的增加而逐渐降低,其中L1 N2.0组与L1 N0组相比,谷氨酸含量差异有显著性(P<0.05)。结论纳络酮能抑制脂多糖刺激大脑皮质星形胶质细胞释放谷氨酸,具有一定的脑保护作用。     

胶乳凝集联合低滴度脂多糖-被动血凝试验对甲型副伤寒的诊断价值

目的：寻找快速、简便，特异性强，敏感性高的甲型副伤寒血清学诊断方法；方法：采用胶乳凝集试验（LPS－Latex）及脂多糖－被动血凝试验（LPS－PHA）检测甲型副伤寒、伤寒患者血清，并同期检测非伤寒患者血清进行统计分析；结果：单项低滴度脂多糖－被动血凝试验及联合试验诊断甲型副伤寒符合分别为86．95％和84．78％，且分别与伤寒及非伤寒组比较有显著意义（P＜0．05，P＜0．001）。两项试验假阳性率分别为12．50％及0（P＜0．001）；结论：胶乳凝集联合低滴度脂多糖－被动血凝试验诊断甲型副伤寒简便、快速，有较高敏感性和特异性。