组织芯片技术在免疫组化及原位杂交阳性对照中的应用

组织芯片亦称组织微阵列(tissue microaryyay,TMA)是将数十个、数百个组织标本整齐地排列在同一张载玻片上的微缩组织切片。组织芯片具有高通量、节约组织原材料和检测试剂、实验条件一致性及实验结果可比性好、实验误差小等优点，在病理学研究中有广阔的应用前景…。我们利用组织芯片技术制作免疫组化及原位杂交的阳性对照组织芯片，将阳性对照的组织芯片与待检测的组织裱在同一张玻璃切片上，进行免疫组化及原位杂交染色，取得了比较理想的结果，现介绍如下。     

构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

利用cDNA微阵列技术筛选成年期与胚胎期睾丸差异表达基因——钙联接蛋白基因

目的 :用cDNA微阵列技术克隆和筛选成年期与胚胎期睾丸差异表达基因 ,以进行睾丸发育及精子发生的调控研究。　方法 :构建人睾丸cDNA芯片 ,分别用正常成人及胚胎睾丸的mRNA探针进行杂交 ,对成人和胚胎睾丸中差异表达的基因进行高流量的比较。　结果 :发现 1条成人睾丸高表达、胚胎低表达的基因———钙联接蛋白 (CLGN)基因。　结论 :运用cDNA微阵列方法可筛选到成年期与胚胎期睾丸差异表达基因     

前列腺上皮内瘤变的基因微阵列分析

目的:通过基因微阵列分析,研究经显微切割后的前列腺上皮内瘤变(PIN)的基因表达谱,并将其与前列腺良性增生(BPH)及前列腺癌的mRNA基因表达谱进行对比,探讨前列腺癌的发生、发展,检测PIN及前列腺癌的肿瘤标志物。方法:采用美国Affymetrix公司的HG-U133A基因芯片,检测了16例人的前列腺组织标本,包括5例良性标本,6例PIN以及5例前列腺癌标本,均为新鲜冰冻组织。为了精确获得上皮细胞基因表达谱,避免周围间质细胞及单核细胞的RNA 对结果的影响,我们采用了激光捕获显微切割技术,分别得到了3组纯的上皮细胞群进行研究。结果:有些基因的表达强度在从良性增生到PIN到癌的转化过程中,呈逐渐改变的趋势,但笔者发现3组间基因表达谱存在非常显著的差异。与BPH及前列腺癌相比,PIN有其独特的基因表达谱。结论:基因表达谱中显著上调及下调的特异性基因,可以将PIN 和BPH及前列腺癌中区分开来;基因微阵列分析也有助于揭示代谢通路及信号转导途径的变化,有利于靶基因治疗。     

新兴细胞生物学技术-组织微阵列研究进展

肿瘤相关基因的研究在肿瘤病理学中占有重要的地位，新兴的细胞生物技术-组织微阵列，具有批量性、快速性、准确性等特点，为肿瘤相关基因的研究提供了一种全新的方法。从组织微阵列技术的原理、主要优势、应用、研究进展、存在的问题和展望等方面作一综述。     

神经节细胞胶质瘤恶变及其差异表达基因分析

目的探讨神经节细胞胶质瘤恶性进展的分子变化,为进一步研究分子病因奠定基础。方法取同一患者不断恶化的3次手术标本,行cDNA微阵列检测,分析在不同阶段持续存在的差异表达基因。结果初发(WHO II级)、复发(WHO III级)和再发(WHO IV级)的标本与正常脑组织相比,差异表达基因共19条,其中下调者16条,上调者3条。在下调的基因中,功能明确者有抑制RAF1/MEK/ERKs激酶通路激活的磷酸酰乙醇胺结合蛋白,抑制肿瘤血管增生、侵袭,调控细胞凋亡的碳酰还原酶;抑制c-myc基因表达的肺库否样因子;参与人DNA切除修复的多聚酶ε。结论神经节细胞胶质瘤恶变过程中持续存在的分子变化,以抑制肿瘤增殖基因表达下调为主,其中RAF激酶抑制蛋白、DNA多聚酶ε和碳酰还原酶是参与细胞信号传导和DNA损伤修复等具重要功能的基因,值得进一步研究。     

基因芯片技术和前列腺癌分子标志物的新发现(文献综述)

前列腺癌的高发生率要求发展新的诊断和治疗策略。近年来 ,DNA微阵列技术的开发和应用标志着生命科学研究领域的一次变革 ,它有望彻底揭示肿瘤进展过程中的基因调节机制。这对于肿瘤诊断准确性的提高、开发作用于致病基因的分子药物从而对肿瘤进行精确治疗 ,具有极其重大的意义。本文对 DNA微阵列技术的原理、在肿瘤研究特别是在前列腺癌研究领域中的应用做一简要介绍 ,以加深对这些生命科学热点问题的认识     

高密度cDNA微阵列技术检测乳腺癌差异表达基因

目的 描绘乳腺癌的基因差异表达谱，以寻找乳腺癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志。方法 用含14000个cDNA克隆的表达微阵列检测乳腺癌组织、乳腺癌旁组织及乳腺非癌组织的mRNA表达，并分析其表达的差异。结果 乳腺癌组织与乳腺非癌组织比较有80个差异表达基因，乳腺癌组织与乳腺癌旁组织比较有57个差异表达基因，乳腺癌旁组织与乳腺非癌组织比较有29个差异表达基因，在乳腺癌组织与乳腺非癌组织和乳腺癌旁组织比较中有14个差异表达基因是一致的。结论 用微阵列技术对乳腺癌的肿瘤相关基因和分子标志作初步探索，为了解中国女性乳腺癌发生发展的分子机制、发展新的诊断和治疗手段提供了信息。     

应用微阵列初步分析髓母细胞瘤的基因表达谱

目的　应用微阵列技术研究髓母细胞瘤的分子发病机理。方法　收集新鲜髓母细胞瘤 4例及正常脑组织 1份的组织标本 ,提取总 RNA,逆转录成 32 P标记的 c DNA探针 ,与 Atlas人肿瘤芯片杂交 ,通过放射自显影获得基因谱 ,应用 Atlas Image TM1.0 1a分析。结果　与正常脑组织相比 ,髓母细胞瘤下调基因 6个 ,上调基因 35个 ;逆转录 -聚合酶链反应技术验证结果与芯片检测结果相符。除少数基因外 ,大部分基因的表达趋势与肿瘤生物学特性相符。结论　髓母细胞瘤是与星形细胞起源胶质瘤具有不同分子发病机理的多基因病变 ,不同基因之间可能存在复杂的相互作用和联系 ,值得进一步研究。     

检测HSV等5种病原体抗体的微阵列技术

目的 建立抗原微阵列技术检测多种病原体抗体。方法 将病原体的基因工程抗原，以电脑操纵的机械手将其点在赖氨酸修饰的玻片上．制备抗原微阵列，与血清反应后随之与Cy3标记的二抗反应，用激光共聚焦扫描仪扫描玻片，检测血清中相应病原体的IgG，并进行了灵敏度和重复性的检测。结果 5种抗原的最低检测限度为HSV1-gG 1．56μg／ml，HSV2-gG 3．125μg／ml，CMV-p150 1．56μg／ml，RV-E1E2 3．125μg/ml，MT-EAM 31．26μg／ml；抗原微阵列与ELISA检测的结果相比有较高的符合率；检测IgG和IgM的灵敏度分别为50pg、10pg；不同批次2张玻片间总体变异系数为IgG 6．52，IgM 18．89。结论 抗原微阵列可用于平行检测血液中病原体特异性抗体。