干细胞克隆技术——成功跨越器官移植的免疫墙

简单地说,临床上存在许多疑难病症,现有的药物无法治疗。 如外伤引起的脑瘫和不同水平的脊髓瘫;某些组织器官退行性变化引起组织细胞功能缺失和细胞死亡;骨质疏松引发的关节软化、变形;帕金森氏病,老年痴呆,糖尿病,心肌梗塞和心、肾、肝功能衰竭等;血液肿瘤细胞极度扩展,引起造血组织衰竭;或肿瘤病人经过度强烈化疗和放疗,骨髓抑制期造血组织的衰竭……     

世相：黄教授忽悠了全世界!

韩国“民族英雄”兼“首席科学家”黄禹锡教授忽悠全世界的事情,全世界都知道了。在儒学的语境中,“民族英雄”兼“首席科学家”,可以说是“人上人”了。古人云:爬得高,跌得重。这位曾经被认为是世界上第一位利用克隆技术获得人类胚胎干细胞的科学家,被查出论文造假,转瞬间从“民族英雄”沦为“民族耻辱”,应了老人言了!     

克隆技术：生命科学研究的机遇与挑战

自从英国科学家用成年绵羊的体细胞克隆出世界首例“多莉”绵羊的消息被海内外的媒体竞相报道后，近一段时间以来，已引起了世界各地生命科学家、政治家和法律学家们的广泛关注，特别是对这一技术是否会用于克隆“人”以及由此所可能产生的社会学和伦理学上的后果，表示出了期盼、忧虑或否定；我国的许多学者也以各种形式提出了面对中国国情的建议，希望政府职能部门能未雨绸级，对我国的克隆技术研究进行行为规范。本文拟对此作一评述，希望这一技术能在我国得到正常发展而不至于走入歧途。一、克隆动物与无性自孩就在人们议论克隆羊的同时…     

PCR产物的克隆方法

ＰＣＲ产物的克隆方法肖翠英张思仲聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）已经成为分子生物学的强有力工具，并应用于核酸检测、序列分析、克隆、突变研究和现代分子生物学的许多其它方面。现今，克隆前扩增ＤＮＡ已经成为日常的操作。...     

谢毅:联合基因可检测50多种重大疾病

2006年4月20日,中国基因界泰斗、基因高效克隆技术发明人、复旦大学生命科学院博士生导师、联合基因集团总裁兼首席科学家谢毅教授飞抵广州,并于当日下午在广东服务中心联合机构——广州现代医院“肿瘤诊疗论坛”就基因检测在肿瘤预防及治疗中的重要作用做了专题报告。报告结束后,谢毅教授莅临集团属下广东服务中心进行了视察,就“全民健康基因系统工程”核心项目“人类疾病易感基因检测”的推广工作进行了实地指导。谢教授指出,一定要将基因检测这一造福人类的新科技成果送到千家万户,造福所有人。目前集团所采用的基因芯片检测技术先进程…     

克隆技术的发展及其伦理学争论

2005年2月18日第59届联合国大会法律委员会以决议的形式通过了一项关于克隆人的政治宣言,该项宣言要求各国禁止有违人类尊严的任何形式的克隆人.表决结果是71票赞成,35票反对,43票弃权.美国、德国、荷兰和巴西等国投了赞成票;而比利时、中国、英国、瑞典、日本和新加坡等赞成治疗性克隆的国家代表投了反对票.关于克隆技术的争论从20世纪开始一直延续到21世纪的今天,在这期间关于克隆技术的争论有高潮也有低谷.克隆技术所引发的伦理之争主要分为四个时期.     

影响PCR-RFLP的相关因素

限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction, PCR-RFLP)是一种模拟体内DNA复制过程的体外酶促合成特异性核苷酸片段技术,又称无细胞分子克隆技术.它以待扩增的两条DNA链为模板,由一对人工合成的寡核苷酸作为介导,通过DNA聚合酶反应,在体外进行特异DNA序列扩增.扩增后,将PCR产物直接酶切、电泳、显色,即可对目的基因进行分类分型.现将我做PCR-RFLP的体会简要陈述如下.     

TAGLN真核表达载体pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-TAG-LN-mut及稳定转染细胞株的构建

目的:构建携tagln基因的真核表达载体,建立稳定转染该质粒的人结肠癌细胞株RKO并鉴定.方法:通过Gateway克隆技术,使用pOTB7-TAGLN-mut与pDONR221进行BP重组反应产生入门克隆,再与pcDNA6.2/EmGFP-BsdV5-DEST空载体进行LR重组反应,生成目的质粒pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-TAGLN-mut通过测序验证目的质粒的插入序列.将携带tagln的真核表达载体和对照质粒稳定转染至人结肠癌细胞株RKO.通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测tagln的mRNA和蛋白表达水平.通过细胞侵袭实验了解transgelin在结肠癌细胞RKO中的作用.结果:携带tagln的真核表达载体测序分析显示插入序列及位点正确;实时荧光定量PCR及免疫印迹结果显示,稳定转染重组目的质粒的细胞株(RKO-TAGLN细胞)中tagln的表达水平与转染对照质粒的细胞株(RKO-CTRL细胞)及野生型RKO细胞相比明显上调,差异具有统计学意义(mRNA相对表达水平分别为45.58±12.79、1.32±0.43和1,P<0.01;蛋白质灰度定量值为1.69±0.04、0.29±0.05和0.29±0.04,P<0.01).细胞侵袭实验提示,RKO-TAGLN细胞较RKO-CTRL细胞的侵袭能力提高(161.76%±61.18%,P<0.01).结论:成功构建携tagln基因的真核表达载体并建立过表达transgelin的稳定细胞株和对照细胞株,为研究transgelin在结肠癌中的作用奠定基础.