HPLC法同时测定田七痛经胶囊中异鼠李素、槲皮素、山柰素

目的 建立高效液相色谱法测定田七痛经胶囊(三七、五灵脂、蒲黄、延胡索、川芎、木香、小茴香、冰片)中异鼠李素、槲皮素、山柰素.方法 采用高效液相色谱法,ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.4％磷酸(50:50);体积流量1.0 mL/min;检测波长360 nm.结果 异鼠李素在1～10 μg范围内线性关系良好(r =0.999 7,n=6),山柰素在0.5～5 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=6),槲皮素在0.5 ～5 μg范围内线性关系良好(r =0.999 9,n=6).异鼠李素、槲皮素、山柰素平均回收率(n=6)分别为99.4％(RSD为0.67％)、101.4％( RSD为1.29％)、100.6％(RSD为0.64％).结论 本法灵敏、准确、专属性强,回收率高,重复性好,适用于田七痛经胶囊的质量控制.     

f_2相似因子法评价银杏酮酯缓释微丸大类成分总黄酮和各类成分的体外释放相关性研究

目的引入f_2相似因子法对银杏酮酯(GBE)缓释微丸的大类成分总黄酮和各类成分(包括黄酮类和萜内酯类)的释放曲线进行分析,以能较全面地评价其体外释放。方法运用紫外分光光度法、高效液相-质谱联用(HPLC-MS)测定GBE缓释微丸中大类成分(总黄酮)和各类成分(槲皮苷、异鼠李素、芦丁、槲皮素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的体外释放率,并进行f_2相似因子计算;采用扫描电镜法观察微丸释药前后的微观结构,结合方程拟合分别对微丸中总黄酮和各类成分的释药机制解析,以验证f_2相似因子法的可靠性。结果优化工艺的GBE微丸黄酮类和内酯类的各成分与大类成分总黄酮的f_2均大于50,说明大类成分总黄酮与各类成分体外释放曲线具有较好的相关性。释药机制解析进一步验证了该结果的可靠性。结论 f_2相似因子法可运用于多组分中药缓释制剂大类成分和各类成分的体外释放评价。     

五味沙棘散对卵清蛋白诱导的过敏性支气管哮喘大鼠的保护作用及机制

目的 探究五味沙棘散对卵清蛋白（ovalbumin,OVA）诱导的过敏性哮喘大鼠的保护作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松（0.5 mg/kg）组和五味沙棘散（0.5、2.0 g/kg）组,建立OVA诱导的大鼠早期支气管哮喘模型,苏木素-伊红（HE）和Masson染色观察支气管病理情况及纤维化程度;免疫组化检测支气管间隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）的表达和分布;ELISA检测血清中免疫球蛋白E（immunoglobulin E,IgE）和白细胞介素-13（interleukin-13,IL-13）水平;亚甲基蓝法和WSP-1荧光探针法测定血清中硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）水平。建立CdCl₂诱导的支气管上皮BEAS-2B细胞损伤模型,MTT法检测细胞活性;Hoechest 33342染色法观察细胞核形态变化;MitoSOX染色检测细胞线粒体活性氧（mitochondrial reactive oxygen species,mtROS）水平;Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、核因子红细胞系2相关因子（nuclear factor erythroid 2-related factor,Nrf2）和Kelch样ECH关联蛋白1（Kelch like ECH associated protein 1,Keap1）蛋白表达。结果 五味沙棘散能够减少支气管黏膜上皮细胞脱落和黏液分泌（P＜0.001）,降低胶原纤维的沉积和Cx43的表达及分布（P＜0.05、0.01、0.001）,降低血清中IgE、IL-13水平（P＜0.05）,升高血清中H₂S水平（P＜0.05、0.01）。五味沙棘散含药血清呈剂量相关性地抑制CdCl₂诱导的BEAS-2B细胞凋亡及mtROS水平（P＜0.01、0.001）,上调Caspase-3和Nrf2蛋白表达（P＜0.05、0.01）,下调Keap1蛋白表达（P＜0.01）。结论 五味沙棘散对OVA诱导的哮喘大鼠和CdCl₂诱导的支气管上皮细胞凋亡均具有保护作用,其机制可能与调控Nrf2/Keap1信号通路有关。     

HPLC梯度洗脱法同时测定参杞酒中的党参炔苷、东莨菪苷、东莨菪亭、槲皮素、山柰酚和异鼠李素

目的：建立HPLC梯度洗脱法同时测定参杞酒中的党参炔苷、东莨菪苷、东莨菪亭、槲皮素、山柰酚和异鼠李素。方法采用Shiseido C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱;流动相A：乙腈,流动相B：0.5％醋酸水溶液,进行梯度洗脱;进样量为20μl;流速：1.0 ml/min;柱温：30℃;检测波长分别为269 nm（党参炔苷）、346 nm（东莨菪苷和东莨菪亭）和360 nm（槲皮素、山柰酚和异鼠李素）。结果党参炔苷、东莨菪苷、东莨菪素、槲皮素、山柰酚和异鼠李素分别在4.59～91.80（r=0.9999）、2.62～52.40（r=0.9996）、1.95～39.00（r=0.9998）、3.34～66.80（r=0.9995）、2.30～46.00（r=0.9991）、2.86～57.20μg/ml（r=0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.27％、97.62％、99.17％、98.50％、97.35％和98.86％,RSD（n=9）分别为1.33％、1.48%、0.99％、1.37%、1.35％、1.70%。结论本文建立的HPLC梯度洗脱法同时测定参杞酒中的上述6种组分,方法操作简便,准确,重现性好,可作为参杞酒全面可靠的质量控制方法。     

异鼠李素对人肝微粒体CYPs活性及大鼠原代肝细胞毒性作用研究

目的 研究异鼠李素对肝脏6种CYPs的体外抑制作用,以及对大鼠原代肝细胞的毒性作用。方法 采用人肝微粒体（HLMs）体外温孵法研究异鼠李素对6种细胞色素P450酶（CYPs）——CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP2E1、CYP1A2和CYP2C9的体外抑制作用;使用HPLC-MS/MS法检测异鼠李素和HLMs共同孵育后的代谢产物;利用体外培养的低CYPs活性的大鼠原代肝细胞,考察不同剂量异鼠李素对细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的影响。结果 50 μmol/L的异鼠李素对CYP2E1和CYP1A2有一定的抑制作用,抑制率分别为59.48%和39.91%;异鼠李素和HLMs共同孵育后,产生去甲基化代谢产物3,3'',4'',5,7-五羟基黄酮,转化为极性和水溶性较高的代谢物;30、100、300 μmol/L的异鼠李素会使大鼠原代肝细胞培养液中的ALT和LDH显著上升（P＜0.01）,100、300 μmol/L异鼠李素使AST显著上升（P＜0.05、0.01）,呈浓度相关性。结论 异鼠李素在体外主要经HLMs代谢,同时对CYP2E1和CYP1A2有一定的抑制作用,可能会使CYP2E1和CYP1A2的底物药物在体内的浓度产生变化,导致一系列药物的相互作用;大量使用异鼠李素可能会造成一定程度的肝细胞损伤,且呈现浓度相关性。临床应用应合理设置剂量,并注意潜在的药物之间的相互作用。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨归芍地黄汤加减方治疗抽动秽语综合征的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接技术结合体内实验验证,探讨归芍地黄汤加减方治疗抽动秽语综合征（Tourette syndrome,TS）的作用机制。方法 通过检索TCMSP和BATMAN-TCM数据库获得归芍地黄汤加减方的活性成分及作用靶点,检索GeneCards和OMIM数据库获得TS疾病相关靶点,将二者靶点取交集,得到交集靶点。利用Cytoscape软件构建活性成分-靶点网络,并对交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）及网络拓扑分析。利用R语言软件及相关程序包对交集靶点进行基因本体（geneontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,对网络拓扑分析后筛选出的关键靶点进行分子对接,并通过动物实验对关键靶点和信号通路进行验证。结果 筛选得到归芍地黄汤加减方治疗TS的活性成分8个,交集靶点32个。主要活性成分包括槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、异鼠李素,关键靶点包括白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-...     

基于“初生-次生代谢产物”互作途径的大果沙棘和中华沙棘差异性研究

目的 分析大果沙棘Hippophae rhamnoides vat. sp L.与中华沙棘H. rhamnoides初生/次生代谢物的差异,并对其生物合成途径变化进行分析。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）法对2个种属的沙棘进行初生及次生代谢产物表征,基于二水平析因-星点设计法（plackett burman-central composite design,PB-CCD）设计对沙棘UPLC-DAD指纹图谱进行研究,优化液相方法,指认共有峰;以偏最小二乘-判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）、聚类分析及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析对大果沙棘、中华沙棘进行差异初生代谢物筛选及相关代谢通路富集;进一步采用质谱多反应检测（multiple reaction monitoring,MRM）对筛选得到具有差异的初生代谢物和次生代谢物进行定量分析;最后,对2个品种沙棘的差异性成...     

油菜花粉中黄酮类化合物的提取与分析

目的 研究油菜花粉中黄酮类化合物的提取方法并进行提取工艺优化,同时建立HPLC-UV法测定槲皮素、山柰酚和异鼠李素3种黄酮类化合物的方法.方法 以总黄酮得率为指标,优选油菜花粉中黄酮类化合物的最佳提取方法和工艺参数;采用Capcell PAK-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-pH 2.2磷酸水溶液(35∶65)洗脱,检测波长360 nm,体积流量1.00 mL/min,柱温40℃,对提取物中3种黄酮类成分进行分析测定.结果 渗漉法为提取油菜花粉中黄酮类化合物的理想方法;3种黄酮类成分分离度良好,各成分质量浓度与峰面积在测定范围内线性关系良好,重现性、稳定性和加样回收率均符合要求.结论 渗漉法适合提取油菜花粉中的黄酮类化合物,所建立的HPLC法稳定可靠、简便易行,可用于油菜花粉中黄酮类化合物的同时定量分析,为油菜花粉原料及其提取物的质量控制和评价奠定了基础.     

Rat lens aldose reductase inhibitory constituents of Nelumbo nucifera stamens

Aldose reductase, the principal enzyme of the polyol pathway, has been shown to play an important role in the complications associated with diabetes. A methanol extract of the stamens of Nelumbo nucifera Gaertn. was shown to exert an inhibitory effect on rat lens aldose reductase (RLAR), and thus was fractionated using several organic solvents, including dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol. The ethyl acetate-soluble fraction, which manifested potent RLAR-inhibitory properties, was then purified further via repeated measures of silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. Thirteen flavonoids: kaempferol (1) and seven of its glycosides (2-9), myricetin 3',5'-dimethylether 3-O-beta-d-glucopyranoside (10), quercetin 3-O-beta-d-glucopyranoside (11) and two isorhamnetin glycosides (12, 13) were isolated from N. nucifera, as well as four non-flavonoid compounds: adenine (14), myo-inositol (15), arbutin (16) and beta-sitosterol glucopyranoside (17). These compounds were all assessed with regard to their RLAR-inhibitory properties. Among the isolated flavonoids, those harboring 3-O-alpha-l-rhamnopyranosyl-(1-->6)-beta-d-glucopyranoside groups in their C rings, including kaempferol 3-O-alpha-l-rhamnopyranosyl-(1-->6)-beta-d-glucopyranoside (5) and isorhamnetin 3-O-alpha-l-rhamnopyranosyl-(1-->6)-beta-d-glucopyranoside (13), were determined to exhibit the highest degree of rat lens aldose reductase inhibitory activity in vitro, evidencing IC(50) values (concentration required for a 50% inhibition of enzyme activity) of 5.6 and 9.0 microm, respectively.     

Assessment of isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside from Acacia salicina: protective effects toward oxidation damage and genotoxicity induced by aflatoxin B1 and nifuroxazide

Antioxidant activity of isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside, isolated from the leaves of Acacia salicina, was determined by the ability of this compound to inhibit xanthine oxidase activity and to scavenge the free radical 2,2′‐azino‐bis (3‐ethylbenzthiazoline‐6‐sulfonic acid) (ABTS^.?) diammonium salt. Antigenotoxic activity was assessed using the SOS chromotest assay. This compound has the ability to scavenge the ABTS^.+ radical by a hydrogen donating mechanism. We also envisaged the study of the antioxidant effect of this compound by the enzymatic xanthine/xanthine oxidase (X/XOD) assay. Results indicated that isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside was a potent inhibitor of xanthine oxidase and superoxide anion scavengers. Moreover, this compound induced an inhibitory activity against nifuroxazide and aflatoxine B1 (AFB1) induced genotoxicity. Taken together, these observations provide evidence that isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside isolated from the leaves of A. salicina is able to protect cells against the consequences of oxidative stress. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.