壳聚糖与神经干细胞生物相容性的研究

目的 探讨生物降解材料壳聚糖与神经干细胞的生物相容性。方法 取SD大鼠胚胎（孕14-16d)大脑皮层组织制成单细胞悬液在无血清培养液中进行培养，获得大量的神经干细胞，再将所获神经干细胞在不同条件下移植接种至壳聚糖膜上联合培养1周，在倒置显微镜下观察神经干细胞生长增殖情况及形态变化，并对其分别进行免疫组化染色，电镜观察，了解壳聚糖对神经干细胞生长，增殖，分化的影响。结果 在无血清联合培养条件下，神经干细胞仍然维持其原有的干细胞特性；在含血清的培养液中，神经干细胞能分化成多种形态的神经细胞，并且在壳聚糖膜上生长良好。结论 壳聚糖与神经干细胞具有良好的生物相容性。     

Carbohydrate moieties of procine 32 kDa enamelin

The structures of asparagine-linked oligosaccharides of porcine 32 kDa enamelin are reported. The oligosaccharides were released by N-oligosaccharide glycopeptidase digestion, and the reducing ends of the oligosaccharides were derivatized with a fluorescent reagent, 2-aminopyridine. The pyridylamino oligosaccharides were separated into eight kinds of oligosaccharides. The structures of these oligosaccharides were determined by a combination of a sequential exoglycosidase digestion and a two-dimensional suger mapping technique. The oligosaccharides consisted of fucose, galactose, mannose, N-acetylglucosamine, and N-acetylneuraminic acid, and were classified into two groups according to their core-sugar chain structures; one was a biantennary-type and the other was a triantennary-type oligosaccharide. The variation of the oligosaccharides in each of these groups was caused by the differences in the number, the site, and the mode of linkage of N-acetylneuraminic acid to the core-sugar chains.     

几丁糖预防术后腹腔粘连的实验研究

目的探讨几丁糖对术后腹腔粘连的预防作用.方法将45只大鼠随机分为A、B、C 3组,于腹腔内浆膜损伤部位分别注入1%乳酸液、32%右旋糖酐-70液和2%几丁糖乳酸液各2 ml,术后14 d处死动物,观察各组腹腔粘连状况.结果 3组粘连分级比较有显著性差异(P＜0.01),C组粘连发生率与另2组有显著差异(P＜0.05).光镜下C组炎症反应轻微,纤维增生不明显;电镜下C组纤维细胞分泌胶原能力弱,间皮细胞增生活跃.结论几丁糖可有效降低大鼠术后腹腔粘连的发生和粘连程度,其作用优于右旋糖酐-70,且不影响切口的愈合.     

骨髓间充质细胞与速固化磷酸钙支架共培养的实验研究

[目的]观察人骨髓间充质干细胞在速固化磷酸钙骨水泥支架中的增殖和生长情况。[方法]将速固化壳聚糖-磷酸钙骨水泥支架材料预先成形。采用全骨髓法分离人骨髓间充质细胞并在体外对细胞进行培养和扩增。72h首次换液,细胞融合80%传代,取第3代细胞用于实验。将细胞与磷酸钙骨水泥支架复合培养,分别利用四甲基偶氮唑蓝MTT法及扫描电镜等检测细胞在材料中的增殖和生长情况。[结果]用酶标仪检测OD值提示共培养后,支架内的细胞数量逐渐增加。扫描电镜结果显示支架材料内部为多孔结构,孔内见有细胞生长,细胞表面可见分泌颗粒。[结论]速固化壳聚糖-磷酸钙骨水泥对人骨髓间充质干细胞有较好的细胞相容性,细胞可在材料内黏附和增殖,是理想的骨组织工程支架材料。     

脱乙酰化反应条件对壳聚糖性能的影响

本文研究了甲壳素在脱乙酰化反应时不同反应条件,如碱浓度、反应时间、反应温度和处理方法对壳聚糖性能,如分子量、脱乙酰化度的影响,探讨了分子主链降解反应与脱乙酰化反应之间的关系。结果表明:随着碱浓度和反应时间的增加,壳聚糖脱乙酰化度提高,而分子量降低;脱乙酰化越高,主链降解程度增加;反应温度升高,脱乙酰化反应速度加快;而采用短时重复多次反应的处理方法,则可增加壳聚糖的脱乙酰化度,并减少主链降解程度。     

PAI－1糖基化位点突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１）是一种Ｍｒ为５０×１０３的单链糖蛋白，有３７９个氨基酸残基，３个Ｎ型糖基化位点。构建ＰＡＩ－１糖基化突变体，以便研究糖链的功能。用寡核苷酸定位突变技术将３个糖基化位点２０９，２６５，３２９位进行突变，把３个糖基化位点都发生了突变的ＰＡＩ－１ｃＤＮＡ组装到真核表达载体ｐＳＶ２中，得到真核表达质粒ｐＺＨ－ｐ１－Ｍ３Ｅ；在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯｄｈｆｒ－）中进行短暂表达，用发色底物法和夹心ＥＬＩＳＡ方法检测培养液中ＰＡＩ－１的活性和含量。结果：糖基化位点突变的ＰＡＩ－１能在ＣＨＯ细胞中表达，但表达水平及活性较低。非糖基化ＰＡＩ－１的活性和抗原分别为４．３４ＩＵ／ｍｌ和３．１５μｇ／Ｌ结论：用寡核苷酸定位突变方法获得了ＰＡＩ－１糖基化突变体，并且在ＣＨＯ细胞中得到表达。     

壳聚糖辐射效应的研究（Ⅰ）──辐照剂量与分子量的关系及辐射裂解的G（S）值

通过粘度的测量，考察了壳聚糖在不同条件下经不同剂量γ射线辐照所引起的分子量的变化，并分别计算了真空和空气中壳聚糖辐射裂解的Ｇ（Ｓ）值。     

几丁糖预防腹膜粘连抑制胶原基因表达的实验研究

目的 :探讨几丁糖在胶原基因表达及预防大鼠腹膜粘连形成中的作用。方法 :制作大鼠回肠浆膜均一缺损的腹膜粘连模型 ,关腹前注入乳酸Ringer液或几丁糖 ,术后 14天进行粘连评分。采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定各粘连组织标本Ⅰ型胶原基因mRNA的表达 ;采用苦味酸天狼猩红染色 -偏振光法及计算机图像分析系统来观察和分析Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维在粘连组织中的分布及染色表达面积。结果 :与正常腹膜和乳酸Ringer’s液组相比 ,几丁糖组大鼠的粘连显著减轻 ,Ⅰ型胶原基因mRNA的表达减弱 ,Ⅰ型胶原形成减少 (P <0 .0 1) ,Ⅲ型胶原在各组间无差别 (P >0 .0 5 )。结论 :胶原基因的过度表达可能在粘连形成过程中有重要的作用 ,几丁糖能抑制Ⅰ型胶原基因的表达 ,减少Ⅰ型胶原的合成 ,从而减轻粘连的程度     

新型壳聚糖对血浆胆红素和细胞因子吸附性能的体外筛选初步研究

目的观察各类新型吸附剂对重型肝炎患者血浆中的胆红素和细胞因子的吸附性能。方法第一步,收集第一组重型肝炎患者的血浆各3ml,以8种不同的吸附剂(1#～3#为致孔剂浓度分别为3%、1%、5%的壳聚糖,4#为胺基化壳聚糖,5#为苯乙烯/二乙烯苯聚合物,6#为后交连苯乙烯/二乙烯苯聚合物,7#为壳聚糖-苯乙烯/二乙烯苯聚合物,8#为壳聚糖-后交连苯乙烯/二乙烯苯聚合物)各1ml进行吸附,检测对胆红素的吸附能力,做吸附剂筛选实验和吸附实验。第二步,用以上筛选出吸附率较好的两种吸附剂各1ml对第二组患者血浆(各3ml)进行胆红素和细胞因子的吸附实验。结果第一步实验显示胺基壳聚糖(4#)和苯乙烯/二乙烯苯聚合物(5#)有较好的吸附效果,4#吸附剂对总胆红素(TBiL)、直接胆红素(DBiL)、间接胆红素(IBiL)的吸附率分别为50.5%±3.4%、57.0%±11.3%、39.0%±7.2%;5#分别为30.1%±2.5%、32.6%±3.0%、27.6%±2.9%。第二步实验显示4#胺基化壳聚糖吸附后血浆中TBiL、DBiL、IBiL、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平下降比5#明显,有统计学意义(P<0.001)。结论胺基化壳聚糖(4#)体外吸附重型肝炎患者血浆中胆红素、细胞因子效果有明显优势。     

Enteral Absorption of Insulin in Rats from Mucoadhesive Chitosan-Coated Liposomes

Purpose. The mucoadhesiveness of polymer-coated liposomes was evaluated to develop a novel drug carrier system for oral administration of poorly absorbed drugs such as peptide drugs. Methods. Multilamellar liposomes consisting of dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) and dicetyl phosphate (DCP) (DPPC:DCP = 8:2 in molar ratio) were coated with chitosan (CS), polyvinyl alcohol having a long alkyl chain (PVA-R) and poly (acrylic acid) bearing a cholesteryl group. The adhesiveness of the resultant polymer-coated liposomes to the rat intestine was measured in vitro by a particle counting method with a Coulter counter. The CS-coated liposomes containing insulin were administered to normal rats and the blood glucose level was monitored. Results. The existence of polymer layers on the surface of liposomes was confirmed by measuring the zeta potential of liposomes. The CS-coated liposomes showed the highest mucoadhesiveness and the degree of adhesion was dependent on the amount of CS on the surface of the liposomes. The blood glucose level of rats was found to be significantly decreased after administration of the CS-coated liposomes containing insulin. The lowered glucose level was maintained for more than 12h after administration of the liposomal insulin, which suggested mucoadhesion of the CS-coated liposomes in the intestinal tract of the rats.